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Stomatin在哺乳动物机械感觉传导中的作用
Stomatin(红细胞膜蛋白7.2b)先在遗传性口形红细胞增多症患者的红细胞膜上发现该蛋白缺失.之后的研究表明,stomatin及其同源物在不同种属的各种组织中广泛表达,并在胆固醇丰富的微区--脂筏中发挥重要功能,例如参与调节离子通道、调节细胞骨架等等.大量实验结果证实,秀丽隐杆线虫stomatin同源物MEC-2在线虫的机械感觉传导中发挥重要作用,提示在哺乳动物中stomatin可能也发挥相同的作用.近有关stomatin与机械感觉传导的研究也越来越多.本文就stomatin及其在哺乳动物机械感觉传导中的作用进行简要介绍.
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日本血吸虫脂筏蛋白的重组表达及其生物信息学分析
目的 在大肠杆菌中原核表达、纯化日本血吸虫脂筏蛋白(rSjFLOTILLIN2),并对其进行生物信息学分析.方法 以日本血吸虫成虫cDNA为模板扩增FLOTILLIN2基因片段,克隆至pET28a(+)质粒,经Xho Ⅰ和EcoRⅠ双酶切以及测序鉴定;重组质粒再转化入E.coli BL21,含重组质粒的菌株经IPTG诱导表达,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定目的蛋白分子量大小.同时采用生物信息学分析方法进行了序列比较和进化树分析.结果 重组质粒(pET28a-FLOTLLIN2)经双酶切及测序鉴定,证明插入片段序列与预期目的基因序列符合.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,体外原核表达的重组蛋白(rSjFLOTILLIN2)分子量大小为48 kD,其与预测的分子量大小一致.经Blast搜索比对发现,日本三角涡虫、白纹伊蚊、地中海果蝇、苜蓿切叶蜂等FLOTILLIN2序列与日本血吸虫FLOTILLIN2相似性高;将日本血吸虫和热带爪蟾、原鸡等15种不同物种来源的FLOTILLIN2编码蛋白进行比较,并构建FLOTILLIN2系统进化树,系统发育分析结果显示,日本血吸虫与涡虫同为一支,遗传距离为接近.结论 日本血吸虫脂筏蛋白基因被成功克隆和表达,为进一步研究打下基础.
