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补体衰变加速因子文献资料
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构建人补体衰变加速因子真核载体并转染NIH/3T3成纤维细胞
目的:构建人补体衰变加速因子(DAF)真核表达载体pSecTag2/HygroB-DAF,并利用壳聚糖组装成纳米微粒复合体,转染小鼠NIH/3T3成纤维细胞.方法:应用PCR方法,从DAF-pGEM-T Easy Vector克隆相关的DNA序列,插入具有相应酶切位点的真核表达载体pSecTag2/HygroB中,构建pSecTag2/HygroB-DAF真核表达质粒,并进行酶切鉴定及序列测定;利用壳聚糖包裹质粒,转染小鼠NIH/3T3细胞,并对转染细胞用抗DAF进行免疫组化染色.结果:DAF基因大小为1049 bp,与基因序列数据库中记载的人DAF cDNA序列结果完全一致;利用壳聚糖-DAF纳米微粒转染NIH/3T3细胞24h后,免疫组化染色显示细胞质弥漫染色阳性.结论:成功构建了人DAF真核表达载体并通过壳聚糖介导转染NIH/3T3细胞.
