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重聚PCR文献资料
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丙型肝炎病毒C区的DNA改组
目的:利用DNA改组技术进行不同基因型别丙型肝炎病毒(HCV)基因组C区的人工进化. 方法:首先利用PCR扩增了三段具有较高序列同源性的460 bp基因片段,然后将其等量混合,在Mg2+存在的条件下,用脱氧核糖核酸酶(DNase Ⅰ)切割成50 bp左右的小片段.这些小片段在不外加引物的条件下,利用PCR反应进行重聚,再将重聚物经过一轮正常的PCR扩增. 结果:获得了与原片段大小相当的基因片段. 结论:这一技术为进一步筛选高活性的HCV C区基因打下基础,有利于从一组序列同源性程度较高的基因库构建随机嵌合基因,并为改组其他基因家族提供了借鉴.
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丙型肝炎病毒C和E1区的DNA改组
目的:利用DNA改组技术进行不同亚型的HCVC和E1区的人工进化.方法:首先利用PCR扩增两段具有较高序列同源性的1kb左右的基因片段,两者相比较同源性大于83%.然后将其等量混合,在Mg2+存在的条件下,用DNase Ⅰ切割成50bp左右的小片段.这些小片段在不外加引物的条件下,利用PCR反应进行重聚,再将重聚物经过一轮正常的PCR扩增.结果:获得了与原来片段大小相当的基因片段.结论:这一技术为进一步筛选高活性的HCV C和E1区打下基础,有利于从一组序列同源性程度较高的基因库构建随机嵌合基因,并为改组其他基因家族提供了借鉴.
