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MicroRNA Let-7b介导甲型流感突变型 PB1重组病毒的构建
目的：疫苗是预防流感所致疾病的有效方法，MicroRNA介导的基因沉默机制为构建新型疫苗提供了新思路。文中旨在构建包含装载有 miRNA Let-7b 结合靶位 PB1基因的甲型流感重组病毒。方法比对 A／Nanjing／108／2009H1N1的PA、PB1、PB2与let-7b的靶序列选定PB1基因为优序列后，通过基因突变，插入Let-7b的结合靶位；构建pDP2000重组表达载体，设计pDP-mu-PB1，同时设计对照组pDP -sclb-PB1，并与其余7个质粒共转染MDCK细胞和293T细胞拯救病毒；留取上清接种鸡胚尿囊腔，血凝法检测病毒，TCID50检测病毒滴度；提取病毒RNA，采用RT-PCR扩增病毒cDNA，通过琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列分析鉴定病毒。结果选择PB1片段优序列（位置83 bp－107 bp），突变片段改变了3个氨基酸，同时有3个碱基不能与Let-7b靶序列配对；酶切鉴定重组质粒构建正确；重组病毒miRT（ miRNA target elements）-H1N1和scramble（scbl）-H1N1的血凝效价分别为1∶32和1∶64，病毒滴度为4．68×105 TCID50／mL和7．94×104 TCID50／mL；测序确认突变病毒包含目的片段。结论构建成功重组病毒株，为进一步的毒力评估实验奠定了基础。
关键词： H1N1流感 miRNA Let-7b 基因重组 反向遗传学 -
miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后脊髓NF-200、GFAP表达的影响
目的:通过观察miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤大鼠的运动功能恢复的作用,探讨miRNA let-7b在损伤脊髓修复中的作用和机制.方法:60只成年SD大鼠分为对照组、BMSCs组、miRNA组,每组20只.采用改良Allen's法制备脊髓损伤模型.造模后1周,BMSCs组行BMSCs移植,miRNA组移植miRNA let-7b慢病毒载体感染的BMSCs,对照组注射生理盐水.移植后第3天至8周,按BBB标准量表对大鼠后肢运动功能进行评分,用免疫组化方法检测脊髓中神经丝蛋白-200(NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果:实验时间内,各组大鼠BBB评分和脊髓NF-200表达持续升高;不同时间点BBB评分和脊髓NF-200表达以miRNA组高,BMSCs组次之,对照组低(P＜0.05).移植后各组脊髓GFAP表达均呈持续性增高,各时间点GFAP阳性表达面积以对照组大,BMSCs次之,miRNA组小(P＜0.05).结论:miRNA let-7b可能通过促进BMSCs分化为神经元样细胞、抑制脊髓损伤后反应性胶质细胞的增生及胶质瘢痕形成等机制促进损伤后的神经功能恢复.
关键词： miRNA Let-7b 骨髓间充质干细胞 脊髓损伤 细胞移植 大鼠
