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原位杂交检测新基因ST13(SNC6)在大肠癌中的表达及临床意义
目的确定新基因ST13在大肠癌中的组织学定位,观察它在大肠癌发生、发展不同阶段的表达情况,探讨其表达与大肠癌临床病理特征的关系.方法用RNA-RNA原位杂交的方法检测ST13基因在30例大肠癌病人的正常肠黏膜、癌旁黏膜、腺瘤以及癌组织中的表达状况.结果 ST13基因表达在大肠的正常腺上皮结构上,着色颗粒位于胞浆,而胞核无或着色较淡,癌组织中没有或有少量表达,且一般较正常黏膜染色为淡;在间质和肌层中未见明显阳性信号.正常黏膜标本中阳性率为20/30;癌旁黏膜中15/30;腺瘤中4/4;癌组织中9/30.ST13基因在同一大肠癌病人正常黏膜和癌组织中表达之间存在显著性差异(P＜0.01).在癌组织中ST13有表达和无表达病例组之间Dukes各期分布有差别,有表达者中属DukesA期和B期为多,C期为少;而无表达者中C期较多,A、B期为少,但差异无显著性(P=0.052).同时,还发现有淋巴结转移者ST13在癌组织中表达阳性率(3/17)低于无淋巴结转移者(6/13),但差异无显著性(P=0.099).结论 ST13基因在大肠癌中的表达率低于相应的正常黏膜,此种低表达多见于Dukes C期及淋巴结转移者,ST13基因可能在大肠癌的发生、发展中起作用.
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大肠癌相关新基因ST13单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定
目的研制抗ST13蛋白单克隆抗体,建立检测方法,探讨ST13基因的生物学特性.方法按淋巴细胞杂交瘤技术制备抗ST13蛋白单克隆抗体,并以亲和层析法纯化单抗,将此单抗作探针用Western-Blot和免疫组化检测标本.结果获得3个抗ST13蛋白单抗的杂交瘤细胞株,杂交瘤细胞培养上清和腹水中单抗的ELISA效价为104～105.以ST13单抗作Westerb-Blot和免疫组化证实该单抗具有高度特异性,可用于检测组织表达的ST13蛋白.结论制备了具有高度特异性和高效价的抗ST13蛋白单抗;建立了Western-Blot及免疫组化检测组织表达的ST13蛋白的方法.
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胃息肉和胃癌组织中HSP70、Apaf-1和ST13的表达及相关性
目的 检测正常胃黏膜组织、胃息肉及胃癌组织中HSP70、Apaf-1和ST13的表达,为胃癌的早期诊断提供一定的临床依据.方法 收集2014年12月-2015年9月于内蒙古包钢医院消化内科行胃镜检查患者的胃黏膜组织,分为正常胃黏膜组、增生性息肉组、腺瘤性息肉组及腺癌组,共72例.运用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测HSP70、Apaf-1和ST13蛋白表达水平.结果 HSP70在正常胃黏膜、增生性息肉、腺瘤性息肉、腺癌组织中的平均灰度值(IOD)分别为0.33±0.05、0.46±0.05、0.77±0.07、0.93±0.04,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).Apaf-1的IOD分别为0.74±0.03、0.65±0.03、0.49±0.06、0.28±0.05,正常胃黏膜组与增生性息肉组比较,差异无统计学意义(P>0.05).其他组两两比较,差异有统计学意义(P<0.05).ST13的IOD分别为0.85±0.11、0.64±0.07、0.31±0.06、0.14±0.01,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).腺瘤性息肉组HSP70与Apaf-1呈负相关(r=-0.817,P<0.05),HSP70与ST13呈负相关(r=-0.818,P<0.05),Apaf-1与ST13呈正相关(r=0.830,P<0.05);腺癌组HSP70与Apaf-1呈负相关(r=-0.816,P<0.05),HSP70与ST13呈负相关(r=-0.969,P<0.05),Apaf-1与ST13呈正相关(r=0.865,P<0.05).结论 HSP70 在胃息肉癌变中表达递增,可用于胃癌早期监测;Apaf-1 及ST13 在癌变中表达递减,监测Apaf-1变化及ST13在胃癌中的特异性降低可作为胃癌诊断指标深入研究;在胃息肉癌变中,HSP70与Apaf-1、HSP70与ST13表达均呈负相关,Apaf-1与ST13呈正相关,联合检测更有助于胃癌的早期诊断.
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实时定量PCR分析ST13基因在肿瘤细胞株中的表达
目的利用实时定量PCR(real-time quantitative PCR)相对定量ST13基因在不同肿瘤细胞株的表达情况.方法提取肿瘤细胞株SW620、A549、Bxpc-3、SMMC-7721、RKO和Bcap-37细胞总RNA,经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录,实时定量PCR扩增,针对内参照GAPDH基因相对定量ST13基因的表达,比较ST13基因在不同组织癌细胞株中的表达.结果 ST13基因在6种肿瘤细胞株中表达高,相当于GAPDH基因表达的1%～20%,细胞株之间ST13基因表达量分高、中、低三类(P<0.05),呈现Bcap-37、RKO>SMMC-7721和Bxpc-3>A549、SW620.结论本方法简便、快速、高效地反映了ST13基因在细胞株中的表达情况,是基因研究中一个实用的技术手段.
