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建立经优化的促P19鼠胚胎癌细胞神经分化模型
目的:建立P19胚胎癌细胞(embryonal carcinoma cells,EC)定向分化为神经样细胞体外模型,用于快速初步确定小分子化合物促神经发生活性.方法:采用单因素变量法进行培养条件探索,考察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,RA)浓度、悬浮天数、贴壁细胞密度和贴壁后培养液选择对分化的影响.4d后形成的拟胚体经胰蛋白酶消化为单细胞,并建立分阶段确定评价指标,适用于不同时相评价.光镜观察细胞表型,神经元特异蛋白β-tubulinⅢ免疫荧光染色加以确认.结果:P19细胞悬浮培养4d,加入RA(终浓度1μmol/L).以单细胞悬液在1.2×106/ml密度贴壁培养为佳条件.光镜观察在第8天即有神经元样细胞表型,在第16天可形成神经元样网状结构,两个评价时间点免疫荧光染色均呈β-tubulinⅢ阳性,并与光镜表型相一致.结论:P19细胞分化为神经元样表型,为小分子促神经分化初级筛选提供模型.
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睾丸生殖细胞肿瘤干细胞
Till和Mulloch(1961)先从血液中发现各种血液细胞谱系共同的干细胞.此后,陆续从各种成体组织及早期胚胎组织中识别及分离出干细胞.干细胞的特征是产生能分化为各种不同形态功能类型的子代细胞,并能通过自我更新而保持其多能性.Lapidot等(1994)的实验证实人类急性髓性白血病的单个白血细胞移植于SCID小鼠后可以繁殖成急性髓性白血病.