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胃癌中MET基因扩增与蛋白表达的关联性分析
目的 探讨胃癌细胞中MET基因扩增与蛋白表达的相关性及其与临床病理特征的关系.方法 应用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)及免疫组化MaxVision法同时检测85例胃癌石蜡包埋组织中MET基因扩增及蛋白表达.结果 FISH检测胃癌细胞中MET基因扩增率为5％ (4/85);MET基因蛋白阳性率为43％ (37/85);MET基因扩增与蛋白表达检出率不同,结果具有统计学意义(P ＜0.005),故两者关联性低.结论 MET基因扩增与蛋白表达不一致,原因有待进一步分析.
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肝细胞生长因子受体靶向shRNA真核表达载体的构建和鉴定
目的:构建和鉴定人肝细胞生长因子受体(cMet)的shRNA的真核表达载体.方法:人工合成针对cMet的4对shRNA序列并定向克隆到siRNA(small interference RNA)真核表达载体RNAi-Ready pSIREN-DNA-DsRed-Express Vector上;采用双酶切和测序法鉴定.结果:酶切及测序鉴定得到的产物与预期的目的基因一致.结论:成功构建肝细胞生长因子受体靶向shRNA的真核表达载体.
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生长抑素作用Cmet抑制肝细胞癌生长的研究
目的观察生长抑素(Somatostatin,SST)对Bel7402肝癌细胞株以及裸鼠种植瘤生长的影响,同时探索SST的抑瘤机制.方法以裸鼠人肝癌转移模型为材料,观察SST对种植瘤生长的影响.以MTT法测量SST对Bel7402细胞增殖的影响,光镜下观察细胞形态的变化.以细胞迁移实验和粘附实验观察细胞侵袭和粘附能力的影响.以流式细胞仪测量细胞周期及细胞表面肝细胞生长因子受体Cmet表达的影响,以及检测细胞表面生长抑素受体2(somatostatin receptor 2, SSTR2)的阳性率.结果 SST治疗可以明显抑制裸鼠人肝癌种植瘤的生长,但SST处理的7402细胞增殖能力和细胞形态无明显改变,细胞的侵袭和粘附能力可见明显下降,细胞生长静止期(G0/G1)的比例显著增加(0.480±0.032vs 0.577±0.009),但未见凋亡峰,细胞表面可见SSTR2的表达,SST可使细胞Cmet的表达明显受抑.结论 SST能通过与SSTR结合抑制肝癌的生长,减少Cmet的表达可能是抑瘤的一个重要机制,而并非直接杀死肝癌细胞和诱导凋亡.
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奥曲肽下调cMet的表达抑制肝细胞癌的生长
目的研究生长抑素类似物奥曲肽对肝细胞癌生长的影响及其抑瘤机理.方法以MTT法检测奥曲肽对Bel7402人肝癌细胞株增殖的影响,光镜下观察细胞形态的变化; 以细胞"划痕"实验和黏附实验观察其对细胞侵袭和黏附能力的影响; 以流式细胞仪检测细胞周期及细胞表面肝细胞生长因子受体cMet表达的变化.以裸鼠人肝癌转移模型为材料,观察奥曲肽对种植瘤生长的影响及其预防种植瘤切除术后复发转移的作用,免疫组化法观察种植瘤内cMet蛋白表达.结果奥曲肽处理后的Bel7402细胞增殖能力和细胞形态无明显改变; 细胞的侵袭和黏附能力随着奥曲肽作用时间的延长明显低于未经奥曲肽处理的Bel7402细胞株(P＜0.05); 处于生长静止期(G0/G1)细胞的比例显著增加(P＜0.01); cMet表达阳性的细胞比例明显减少(P＜0.001).裸鼠人肝癌种植瘤的生长受到明显抑制(P＜0.001),奥曲肽的抑瘤率为67.9%,种植瘤内cMet的阳性表达程度也显著降低; 同时,种植瘤切除后无一例出现复发转移,而未经奥曲肽处理者,有3例复发且其中1例死亡,肝内转移瘤内cMet表达亦高于原种植瘤,但差异无统计学意义.结论奥曲肽能通过下调cMet的表达抑制肝癌的生长.
