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卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段的克隆与分析
目的 建立卡氏肺孢子虫动物模型,体外扩增卡氏肺孢子虫MSG基因部分片段,方法取肺孢子虫肺炎大鼠肺组织制备卡氏肺孢子虫(Pc)DNA,并以此模板扩增MSG基因片段,将PCR产物与pGEM-T-easy载体连接,转化E.coli DH5a,在含氨苄青霉素(Amp)的LB培养基上筛选出重组子,提取重组质粒,并通过PCR、酶切及测序验证,并进行序列比较分析;结果 PCR扩增获得长度为554bp的序列,测序结果与报道的基因序列相比,碱基序列完全相同.结论 本研究从卡氏肺孢子虫DNA中成功获得MSG基因,MSG基因的克隆,为进一步开展MSG蛋白致病机制、基因工程疫苗等研究奠定基础.
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卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒构建与表达
[目的]构建大鼠源卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒,进行表达.[方法]以卡氏肺孢子虫DNA为模板,应用PCR扩增MSG基因片段,连接至GEM-T Easy载体,再克隆至PCDNA3.1(+)载体.构建的重组表达质粒经酶切、PCR鉴定后转染至COS-7细胞,并进行大量增殖.RT-PCR验证转染基因的表达.[结果]重组表达质粒PCDNA3.1(+)/MSG经酶切及PCR鉴定结果表明构建成功.RT-PCR结果显示MSG基因片段成功转染至COS-7细胞,并在其中进行基因表达.[结论]成功构建了PCDNA3.1(+)/MSG重组质粒,并在COS-7细胞中表达,为进一步进行核酸疫苗的研究打下基础.
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卡氏肺孢子虫MSG抗原片段细胞表位的预测
[目的]预测卡氏肺孢子虫主要表面抗原(MSG)片段的B细胞和T细胞抗原表位. [方法]运用Sig-nalp3.0、EMBOSS等网络服务器推测卡氏肺孢子虫MSG抗原片段的B细胞和T细胞抗原表位,分析预测结果. [结果]MSG抗原片段存在3个潜在的B细胞抗原表位及6个潜在的T细胞抗原表位.B细胞抗原表位在氨基酸序列的位置为69-79、96-101、133-140aa 3个区域内或其附近;T细胞抗原表位在氨基酸残基的位置为7-22、28-43、20-35、40-55、53-68、86-101aa. [结论]MSG抗原表位的预测为有目的的克隆基因片段,研究高效的表位疫苗奠定基础.
