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卡氏肺孢子虫肺炎大、小鼠低死亡率动物模型的建立
为建立低死亡率卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)SD大鼠和ICR小鼠动物模型,本试验将雌性SD大鼠和ICR小鼠分别随机分为实验组和对照组,实验组采用按体重定量皮下注射地塞米松的方法,免疫抑制诱导建立PCP动物模型,对照组注射与地塞米松等体积的生理盐水.分别制作肺印片,经瑞-姬氏复合染色后,检查卡氏肺孢子虫包囊.制作肺组织病理切片,经HE染色后观察肺组织病理变化.用地塞米松诱导后,实验组SD大鼠和ICR小鼠死亡率均为0,肺印片阳性率均为76.7%(23/30和23/30).肺组织出现典型的病理变化,并可观察到Pc包囊.实验组SD大鼠体重下降明显,与对照组体重比较具有极显著性差异(P＜0.01).ICR小鼠经诱导后,体重变化不显著.采用按体重定量皮下注射地塞米松的方法可建立低死亡率PCP动物模型.
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DNA拓扑异构酶抑制剂及其抗卡氏肺孢子虫的研究进展
目前,生物医学的研究已集中在寻找新的干预措施来控制寄生虫性公共卫生问题.分子生物学和细胞生物学惊人的成就,提供了发现和评价药物分子靶的机会.DNA拓扑异构酶--"细胞内的魔术师",几乎涉及到所有控制DNA的生物过程,已呈现出作为设计新型药物的重要靶点(Chowdhury and Mayumder,2004).过去的20多年,拓扑异构酶的研究已从基础扩展到临床,美国国立癌症研究所(NCI)已将Topo工抑制剂列为重点研究的六大类抗肿瘤药物之一(Liu,1989).本文主要就拓扑异构酶抑制剂及其抗卡氏肺孢子虫的研究综述如下.
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卡氏肺孢子虫包囊抗原纯化方法的研究
目的研究卡氏肺孢子虫包囊抗原的纯化方法. 方法肌肉注射地塞米松诱发大鼠卡氏肺孢子虫肺炎,瑞-姬氏染液复合染色法检获肺组织中的肺孢子虫包囊,用改进的胶原酶消化法、Percoll不连续密度梯度离心分离、超声粉碎纯化卡氏肺孢子虫包囊抗原. 结果采用浓度为0.05%胶原酶消化2次,30 min/次,在1.030 g/ml密度层可获得相对纯净而完整的卡氏肺孢子虫包囊抗原. 结论本研究可提供高纯度卡氏肺孢子虫抗原,为进一步建立对卡氏肺孢子虫肺炎的有效诊断方法具有十分重要的意义.
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青蒿素衍生物体外抗卡氏肺孢子虫作用的扫描电镜观察
目的观察体外培养的卡氏肺孢子虫(Pc) 经双氢青蒿素、青蒿琥酯作用后不同时相虫体表面结构变化. 方法将Pc接种入含HepG-2细胞的培养皿内并分别加入双氢青蒿素50 μmol/L、青蒿琥酯100 μmol/L、喷他脒15 μmol/L、0.3%乙醇与空白对照.双氢青蒿素组于用药后1、2、4、8、12、16 h作扫描电镜观察,后4组于用药后 12 h取样作扫描电镜观察. 结果双氢青蒿素作用2 h后,Pc表面开始出现损伤,初为表面绒毛脱落,残存绒毛肿胀呈球状,虫体体积增大.随着时间延长,虫体表面损伤明显,8 h后表膜出现大小不等孔洞.青蒿琥酯组改变相同,但较轻微. 结论青蒿素衍生物可引起Pc虫体表膜损伤,通透性增加,功能障碍.
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用PCR诊断不同虫荷量的大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的价值
目的评价在不同虫荷量条件下用PCR诊断大鼠卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)的价值.方法将PCP大鼠随机分为药物治疗组及未治疗组,测定其肺虫荷量,收集其支气管灌洗液(BALF)和血清标本,用PCR和半套式(Sn)PCR检测标本中的卡氏肺孢子虫基因,比较PCR和环六亚甲基四胺银(GMS)染色结果,及与病鼠肺虫荷量的关系.结果虫荷量高的未治疗组病鼠的BALF标本PCR、Sn PCR及GMS染色阳性率分别为100%、100%和92.6%,差异无显著性(P＞0.05);而虫荷量低的治疗组的PCR(88.1%)、Sn PCR(94.9%)阳性率均显著高于GMS染色镜检阳性率(30.5%)(P＜0.05).肺虫荷量>500个/mg肺的PCP大鼠,血清PCR阳性率显著高于≤500者(分别为42.9%和1.7%).结论PCR可用于虫株负荷量较低时的PCP诊断,对判断PCP病情及疗效考核亦有一定的帮助.
关键词： 肺炎 卡氏肺孢子虫 环六亚甲基四胺银染色 聚合酶链反应 半套式聚合酶链反应 -
卡氏肺孢子虫低死亡率SD大鼠动物模型的建立
目的建立低死亡率卡氏肺孢子虫肺炎(PCP) SD 大鼠动物模型. 方法将雌性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组采用按体重定量皮下注射地塞米松免疫抑制的方法诱导建立PCP动物模型,对照组注射与地塞米松等体积的生理盐水.分别制作肺印片,经瑞-姬氏复合染色后,检查卡氏肺孢子虫包囊.制作肺组织病理切片,经HE染色后观察肺组织病理变化.制作感染大鼠肺组织超薄切片,透射电镜观察Pc包囊和滋养体. 结果用地塞米松诱导后,实验组SD大鼠死亡率为0,肺印片阳性率为76.7%(23/30).肺组织出现典型的病理变化,并可观察到Pc包囊.实验组SD大鼠体重下降明显,与对照组体重比较具有极显著性差异(P<0.01).电镜下可观察到Pc包囊和滋养体的形态结构. 结论采用按体重定量皮下注射地塞米松的方法可建立低死亡率PCP动物模型.
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卡氏肺孢子虫虫体负荷与肺损伤的关系研究
为研究卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii, PC)虫体负荷与肺损伤的关系,采用清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠(50只)每周两次皮下注射醋酸可的松,连续8～12 wk,建立卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)模型.共计14只大鼠PCP诱导成功.测定支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数及分类、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、Ⅳ型胶原酶(MMP-2、MMP-9)等肺损伤的活性指标.并根据病理组织观察计数虫体累及肺泡数多少,将PC虫体负荷分为轻度组(每100个肺泡中被虫体累及肺泡数<25%,A 组,n=6,)和中重度组(每100个肺泡中被虫体累及肺泡数≥25%,B组,n=8),比较PC虫体负荷与肺损伤的关系.6只清洁级SD大鼠作为正常对照组(C组).结果在PC虫体负荷中重度组的BALF中白细胞总数(6.8×106/L±1.7×106/L)较轻度组(3.8×106/L±1.2×106/L)明显增加,但分类差异不明显.中重度组BALF中ALB为(892.7±468.9) μg/ml,较轻度组的(262.2±169.3) μg/ml明显为高(P<0.01) ;正常对照组仅为(26.3±21.0) μg/ml.中重度组TP为(1 755.6±705.6) μg/ml、LDH为(25.8±5.5) U/dl,显著高于轻度组[TP (783.5±553.0) μg/ml、LDH (14.1±6.2) U/dl](P<0.01) ;正常对照组TP 和LDH分别为(62.8±19.6) μg/ml、(3.7±2.5) U/dl .中重度组Ⅳ型胶原酶活性(MMP-2亮度值1 102±169、MMP-9亮度值1 218±257)较轻度组(MMP-2亮度值459±274 、MMP-9亮度值449±225)明显增加(P<0.01) ;正常对照组未显示Ⅳ型胶原酶活性.ALP在两组中差异虽无显著性,但较正常对照组明显为高.本实验表明,PC肺炎时有明显的肺损伤的存在,且肺损伤的程度与PC虫体负荷有关,即虫体负荷愈大其所致的肺损伤程度愈严重.
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卡氏肺孢子虫扫描电镜观察
目的 观察卡氏肺孢子虫表面结构. 方法 通过皮下注射地塞米松建立大鼠卡氏肺孢子虫肺炎动物模型.处死卡氏肺孢子虫阳性大鼠,取肺脏磨成匀浆,通过Percoll密度梯度离心分离提取虫体,使用扫描电子显微镜观察. 结果 在扫描电镜下观察到表面光滑和粗糙两种状态的卡氏肺孢子虫.表面粗糙型虫体可见微绒毛,粗细不等的管状结构及大小不等的颗粒,并观察到体壁凹陷、伪足及脱囊虫体. 结论 扫描电镜观察卡氏肺孢子虫呈多态性,可见虫体脱囊、伪足及体壁孔.
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PCR及GMS染色法对肺孢子虫肺炎的临床诊断价值
目的评价PCR及六胺银(GMS)染色法对肺孢子虫肺炎(PCP)的临床诊断价值. 方法用PCR及GMS染色法检测临床拟诊PCP患者及非PCP患者的痰液标本,比较两种方法的敏感性和特异性. 结果在40例临床拟诊PCP患者的痰标本中,用PCR 方法检测肺孢子虫DNA,结果均为阳性,其中有12例患者用SMZ治疗后复检,PCR全部转阴;而用GMS染色镜检,阳性率仅为35.0%(14/40).20例非PCP呼吸道感染者的痰液PCR和GMS染色镜检结果均为阴性. 结论用GMS染色法诊断PCP,特异性高但敏感性差;PCR的敏感性高于GMS染色法,适于临床筛查和疗效考核.
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SPA-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原的研究
目的探讨SPAK-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原对诊断卡氏肺孢子虫肺炎的价值.方法采用SPA-ELISA检测免疫抑制大鼠模型在不同时期肺泡灌洗液(BALF)和血清中肺孢子虫(PC)抗原,以及造血干细胞移植并发肺炎患者痰液和血清抗原,并与病原学检查结果比较.结果感染大鼠于用药后第4周,BALF中PC抗原,以及肺组织印片和BALF涂片包囊检查开始出现阳性,但前者阳性率(60%)高于后者(20%和40%),而且全部阳性达到的时间(8周)也早于后者(10周).第10周有2只鼠血清抗原阳性,但此后又转阴.30例肺炎患者痰液抗原阳性8例,阳性率为26.67%,8例抗原阳性患者中只有3例发现包囊,符合率为37.5%.血清抗原检测全部阴性.结论 SPA-ELISA检测痰液和肺泡灌洗液抗原比病原学检查敏感性高,而检测血清抗原不适用于诊断卡氏肺孢子虫肺炎.
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卡氏肺孢子虫感染大鼠脾微量元素的测定
目的探讨卡氏肺孢子虫(PC)感染对大鼠脾脏中6种微量元素(Ca++、Mg++、Fe++、Cu++、Zn++、Mn++)的影响. 方法将30只SD大鼠随机分为实验组和对照组.实验组每只大鼠皮下注射地塞米松1 mg/次,每周2次,诱导PC感染.10周后将大鼠处死,取脾脏,用原子吸收分光光度计测定各组微量元素的含量. 结果与对照组相比较,PC感染组脾脏中Zn++、Cu++的含量(23.82 μg/g干重、18.31 μg/g干重)明显低于对照组(45.49 μg/g干重、26.35 μg/g干重)(P<0.05),Ca++、 Mg++、Fe++、Mn++的含量(218.55 μg/g干重、234.78 μg/g干重、217.96 μg/g干重、0.96 μg/g 干重)变化不明显. 结论卡氏肺孢子虫感染大鼠脾脏中微量元素发生了变化.
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卡氏肺孢子虫基因的研究
卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii, P.c)是肺孢子虫肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia,PCP)的病原体,属机会性致病原虫,感染多见于免疫功能受损人群,如先天性免疫缺陷者、免疫功能低下婴幼儿[如婴儿暴死征候群(Sudden infant death,SIDS )]、长期接受免疫抑制剂和抗代谢药物治疗的器官移植和肿瘤病人.P.c感染引起的肺部炎症,常是导致艾滋病(AIDS)患者死亡的主要原因.PCP被视为AIDS患者的"标志病".据统计未经药物预防的AIDS患者约80%感染P.c.随着HIV携带者及AIDS患者人数的不断上升,以及器官移植和肿瘤病例的增加,对卡氏肺孢子虫的研究也倍受关注[1,2],本文仅就卡氏肺孢子虫的分类及基因特点的研究综述如下.
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环介导等温扩增技术检测卡氏肺孢子虫的研究
目的 环介导等温扩增(LAMP)技术检测卡氏肺孢子虫(Pc).方法 醋酸可的松经皮下注射Wistar大鼠诱导Pc,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)提取Pc基因组DNA.设计4条扩增Pc线粒体核糖体大亚基(mtrRNA)基因的LAMP引物,以结核杆菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、弓形虫、大鼠白细胞为对照,进行LAMP反应.LAMP产物经显色、电泳及酶切鉴定.将Pc DNA 10倍稀释后同时进行LAMP和PCR,比较其敏感性.结果 Pc检测管经显色后呈绿色(阳性),对照组均呈棕色(阴性).Pc LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,扩增产物经Tail限制性内切酶酶切鉴定正确,对照组均无扩增产物.LAMP可检测到虫体DNA的低浓度是lP9/pJ,为PCR的10倍.结论 检测Pc的LAMP方法敏感、特异及简便.
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非霍奇金淋巴瘤予含利妥昔单抗化疗后卡氏肺孢子虫肺炎2例报告并文献复习
目的：探讨非霍奇金淋巴瘤予含利妥昔单抗化疗与卡氏肺孢子虫肺炎的相关性。方法研究报告2例含利妥昔单抗化疗后确诊卡氏孢子虫肺炎病例，并结合文献进行分析。结果2例患者临床表现为发热、干咳、气短，迅速出现急性呼吸窘迫综合征，胸部 CT 表现为两肺弥漫性毛玻璃阴影，治疗主要依靠大剂量复方磺胺甲基异恶唑伴或不伴卡泊芬净。结论对免疫力低下患者，尤其非霍奇金淋巴瘤予含利妥昔单抗化疗后出现快速进展的低氧血症应警惕卡氏肺孢子虫肺炎，早期诊断、早期治疗和合理预防是治疗此病的关键。
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用双氢青蒿素防治卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究
目的观察双氢青蒿素防治大鼠卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)的效果.方法经皮下注射醋酸可的松诱导大鼠发生PCP.将受试大鼠随机分为实验组和对照组,双氢青蒿素防治方案分为小剂量长程预防、小剂量长程治疗及大剂量短程治疗三种.用肺重/体重、肺虫荷量及肺泡卡氏肺孢子虫(Pc)感染率3项指标考核防治效果.结果抽样检查证实大鼠已成功诱导PCP,均为重度感染.方差分析及卡方检验显示,用双氢青蒿素防治的三组大鼠的三项指标均明显低于两个未防治对照组(P＜0.05或0.01),与甲氧磺胺嘧啶-磺胺甲基异恶唑(TMP-SMZ)标准剂量治疗对照(G)组无显著性差异(P＞0.05).结论双氢青蒿素能有效防治大鼠的PCP,效果与标准剂量TMP-SMZ接近.
关键词： 肺炎 卡氏肺孢子虫 大鼠模型 双氢青蒿素 甲氧磺胺嘧啶-磺胺甲基异恶唑 -
艾滋病肺孢子菌肺炎的临床及影像学表现分析
目的:总结艾滋病肺孢子菌肺炎(PCP)的影像学特征,以提高该病影像学诊断水平.方法:回顾性分析3例艾滋病PCP确诊患者的胸部影像学资料及特点.结果:例1首次胸片及CT检查示双肺随机分布的多发斑片状、大片状渗出性高密度影,伴磨玻璃密度渗出影;抗渗出治疗1周复查,病变进展至双肺弥漫渗出伴实变.例2初次CT检查示双肺弥漫分布的磨玻璃渗出及部分实变影,伴间质渗出改变;抗感染抗病毒治疗5 d复查CT,双肺渗出无明显吸收,肺实变显著进展,范围扩大,大量纵隔气肿.例3双肺弥漫性多发片状磨玻璃影及实变影,以肺门为中心向心性实变、背侧实变,左侧少量胸腔积液.结论:艾滋病PCP影像学表现具有特征性,结合症状、体征及实验室检查,对临床诊断有较好地提示.
关键词： 放射摄影术 体层摄影术 X线计算机 获得性免疫缺陷综合征 卡氏肺孢子虫 -
卡氏肺孢子菌肺炎二例报道及文献复习
卡氏肺孢子虫(pneumocystis carinii,PC)是一种机会感染性真菌,在使用免疫抑制剂患者及艾滋病等免疫缺陷患者,卡氏肺孢子虫所致的卡氏肺孢子菌肺炎(pneumocystis carinii pneumoni-a,PCP)是常见的感染和致死原因之一[1].卡氏肺孢子虫黏附于肺泡I型上皮细胞而进行繁殖,损失上皮细胞,暴露基底膜[2],所致的肺泡炎是PCP重要的病理改变[3].我们介绍2例PCP患者的临床、胸部影像学及病理资料,并复习文献,以提高对PCP的认识.
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青蒿素衍生物抗卡氏肺孢子虫体外作用的研究
目的研究不同浓度青蒿素衍生物双氢青蒿素、青蒿琥酯对体外培养卡氏肺孢子虫的作用。方法接种卡氏肺孢子虫（Pc）于人肝癌细胞系（HepG-2）。4 h后加入试验药物和对照试剂。双氢青蒿素药物浓度分别为：100、50、10、5、0.5 μmol/L；青蒿琥酯药物浓度分别为：100、50、10、5 μmol/L；对照药喷他脒：15 μmol/L。以后每隔1 d取培养液观察，分别作六亚甲基四胺银(GMS)和Diff-Quik （DQ）染色计数Pc包囊和滋养体数目。结果 Pc滋养体和包囊在体外培养细胞上的生长高峰出现于第5 d，双氢青蒿素浓度为50 μmol/L和100 μmol/L时对Pc滋养体的抑制率分别为88.0%与90.1%，与喷他脒15 μmol/L的抑制率90.0%相当；而青蒿琥酯浓度为100 μmol/L时方可达到Pc滋养体抑制率83.4%。Pc包囊抑制率，双氢青蒿素和青蒿琥酯浓度为100 μmol/L时分别为67.5%和67.3%，与喷他脒的抑制率75.0%之间无统计学差异。结论双氢青蒿素和青蒿琥酯在一定浓度时对Pc的抑制作用与喷他脒相当；而双氢青蒿素的抑制作用略高于青蒿琥酯。两者对Pc滋养体的抑制率均高于对Pc包囊。
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肾病综合征患者合并卡氏肺孢子菌肺炎一例
卡氏肺孢子菌肺炎（pneumocystis carinii pneumonia， PCP）又称卡氏肺囊虫肺炎，是由卡氏肺孢子虫引起的间质性浆细胞性肺炎，是条件性肺部感染性疾病，多发生于免疫功能缺陷或长期接受免疫抑制剂治疗者，也是艾滋病患者常见的感染和致死原因之一［1］。近年来，随着免疫抑制剂的应用及器官移植的开展，非艾滋病患者的 PCP 发病率明显升高［2］。现将我科收治的1例肾病综合征患者在使用糖皮质激素、细胞毒药物期间合并 PCP 的诊治及预后情况报道如下。
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高海拔地区艾滋病合并肺部感染10例临床分析
目的 探讨艾滋病(AIDS)合并肺部感染的临床特点.方法 回顾性分析青海大学附属医院和青海省传染病院各5例艾滋病合并肺部感染的患者的临床资料,并复习相关文献.结果 10例患者中男性6例,女性4例,平均年龄31岁.感染艾滋病病毒(HIV)途径主要是经输血和性传播.10例患者中合并卡氏肺孢子虫肺炎3例(好转2例,死亡1例),肺结核3例(好转2例,死亡1例),真菌性肺炎2例(好转1例,死亡1例),细菌性肺炎2例(好转).结论 肺部感染是艾滋病常见的机会性感染,其临床表现及对药物治疗的反应和预后均与一般肺部感染有所不同,因此了解艾滋病合并肺部感染的临床特点及影像特征,对艾滋病患者的早诊断、早治疗具有重要意义.
