卡氏肺孢子虫基因组的可塑性

卡氏肺孢子虫肺炎

本文就卡氏肺孢子虫肺炎的病原体,感染途径,临床表现,诊断治疗及预防等方面作一概述,为卡氏肺孢子虫肺炎的预防控制提供参考.

卡氏肺孢子虫基因分型研究进展

本文就近年来卡氏肺孢子虫基因分型研究及其临床流行病学的意义等研究进展进行了综述.

卡氏肺孢子虫动物模型的建立及其检测方法进展

本文叙述了卡氏肺孢子虫的动物模型的建立及其主要检测方法的研究现状.重点阐述了病理学检测方法、免疫检测方法、PCR检测方法.

179从rRNA的内转录间隙核苷酸序列多样性区分日本人体卡氏肺孢子虫的基因型

077 HIV蛋白酶抑制剂抗卡氏肺孢子虫的体外研究

感染卡氏肺孢子虫大鼠血清中可溶性细胞黏附分子-1(sICAM-1)变化的研究

目的 检测卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠血清中可溶性细胞黏附分子-1(sICAM-1)水平,以及经复方磺胺甲噁唑(TMP-SMZ)治疗后对sICAM-1含量的影响.方法 纯系Wistar大鼠50只,随机分为PCP模型组(P组18只)、TMP-SMZ治疗组(S组18只)及正常对照组(N组14只).P组及S组于大鼠后腿肌肉注射地塞米松(1 mg/只,每周2次、间隔3 d),诱导建立PCP大鼠模型.N组同法注射生理盐水.镜检确认PCP诱导成功后,S组从第3周起灌胃TMP-SMZ[每天1次,250 mg/(kg·d)],5 d为1疗程,间隔2周,共3个疗程.分别于第0、3、6、9及12周取血,检测血清中sICAM-1水平,观察肺脏、肝脏病理及病原学变化.结果 血清sICAM-1水平,P组第3周的(1.847±0.50)ng/ml显著低于第0周的(2.407±0.81)ng/ml(P＜0.05);S组第3周的(1.787±0.59)ng/ml显著低于第0周的(2.478±0.59)ng/ml(P＜0.01),以后逐渐上升.P组第9周的(3.233±0.83)ng/ml、12周(3.984±0.87)ng/ml显著高于第0周的(2.407±0.81)ng/ml(分别为P＜0.05,P＜0.01);S组第12周的(3.621±1.62)ng/ml显著高于第0周的(2.478±0.59)ng/ml(P＜0.05).P组与S组第9、12周[分别为(2.697±0.78)ng/ml及(3.621±1.62)ng/ml]均显著高于N组(分别为P＜0.05、P＜0.01).S组与P组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 大鼠血清中sICAM-1含量较低,但在诱导PCP后其含量显著增高.

不同品系小鼠对卡氏肺孢子虫的易感性及其免疫反应的研究

目的探讨不同品系小鼠对卡氏肺孢子虫(P.c)的易感性及其免疫反应.方法以接触传播方式使BALB/c和C57BL/6小鼠(各15只)感染P.c.观察小鼠与传染源接触4、5、6 wk后肺内虫数、支气管肺泡灌洗液中CD4+T细胞和CD8+T细胞及血清IgG水平的变化.结果与传染源接触4 wk,小鼠肺内均可检出P.c,之后,BALB/c小鼠虫数继续增高,5 wk末达高峰.4 wk时C57BL/6小鼠虫数无明显变化,5 wk时显著少于BALB/c小鼠.两组小鼠支气管肺泡灌洗液内CD4+CD62lowT细胞和CD8+CD62lowT细胞数明显增多,血清IgG抗体水平显著上升.6 wk小鼠肺内P.c均转阴.结论BALB/c比C57BL/6小鼠更易感染P.c.BALB/c和C57BL/6小鼠感染P.c后5wk可产生有效的细胞和体液免疫反应并清除肺内感染的P.c.

肾移植患者感染卡氏肺孢子虫一例

卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)是间质性浆细胞性肺炎的病原体,属条件致病,如不及时对症治疗常导致呼吸衰竭而死亡.我院诊治此病尚属首例,报道如下.

卡氏肺孢子虫p55抗原片段免疫原性的研究

目的 研究卡氏肺孢子虫p55基因片段重组质粒表达产物的免疫原性.方法 原核表达质粒pGEX-570的表达产物融合蛋白GST-p55/570,经谷胱甘肽(GST)琼脂糖凝胶纯化后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察.将33只BALB/c小鼠随机分为3组(每组8～13只),分别用GST-p55/570(50 μg/只)、GST(50 μg/只)和PBS免疫,每2周1次,共4次.末次免疫后7 d,分离小鼠脾细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测淋巴细胞增殖反应;分别于免疫前和初次免疫后14、28、42和49d,采血分离血清,ELISA检测血清中GST-p55/570抗体水平.用GST-p55/570组初次免疫后49 d的血清分别与GST-p55/570和GST反应,进行蛋白质印迹(Western blotting)分析.结果 表达产物GST-p55/570的相对分子质量(Mr)约为47 000.MTT法结果显示,GST-p55/570组小鼠淋巴细胞的刺激指数(2.063 0±0.1602)显著高于GST组(1.134 5±0.073 5)和PBS组(1.124 8±0.041 6)(P值均<0.01).免疫后14～49 d,GST-p55/570组小鼠的血清抗体水平均显著高于GST组和PBS组(P值均<0.01).Western blotting结果显示,免疫后血清能与GST-p55/570发生特异性反应.结论 融合蛋白GST-p55/570能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫.

黄芩苷对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠TNF-α和sICAM-1的调节作用

目的 研究黄芩苷对卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和可溶性细胞黏附分子1(sICAM-1)的调节作用.方法 49只SD大鼠随机均分7组,分别为正常对照组(A组)、免疫抑制对照组(B组)、有效药物对照组(C组)、黄芩苷预防组(D组)、黄芩苷低(E组)、中(F组)和高剂量治疗组(G组).A组不做任何处理,其他各组均于腹股沟皮下注射地塞米松磷酸钠(每次3.5 mg/只,每周2次,连续注射6周),诱导其免疫抑制建立大鼠卡氏肺孢子虫感染动物模型.D组注射地塞米松磷酸钠3周后,灌胃黄芩苷100 mg/(kg·d)连续5周.C、E、F和G组于连续注射地塞米松磷酸钠6周后给药,其中C组灌胃磺胺甲基异恶唑(SMZ)250 mg/(kg·d)和甲氧苄胺嘧啶(TMP)50mg/(kg·d),连续2周;E、F和G组分别灌胃黄芩苷100、200和400 mg/(kg·d),均连续2周.B组不给药.各组大鼠均于第8周末摘眼球取血、分离血清,用放射免疫分析法检测TNF-α含量,ELISA法检测sICAM-1含量.同时剖杀大鼠取肺组织制作印片(六胺银染色)和病理切片(HE染色),观察其病理学变化.结果 大鼠血清TNF-α含量.黄芩苷预防组[(2.14±0.14)ng/ml]及低[(2.57±0.15)ng/ml]、中[(1.46±0.14)ng/ml]和高[(1.12±0.13)ng/ml]剂量治疗组均高于正常对照组[(0.70±0.21)ng/ml](P<0.05),低于免疫抑制对照组[(3.65±0.73)ng/ml](P<0.01).有效药物对照组[(1.59±0.14)ng/ml]明显高于正常对照组(P<0.01),低于免疫抑制对照组(P<0.01).血清sICAM-1含量,黄芩苷预防组[(618.68±52.42)pg/ml]及低[(814.29±61.11)pg/ml]、中[(498.08±32.56)pg/ml]、高[(377.06±56.56)pg/ml]剂量治疗组均低于免疫抑制对照组[(1 247.39±288.57)pg/ml](P<0.05),有效药物对照组[(386.95±44.98)pg/ml]低于免疫抑制对照组(P<0.01).黄芩苷各治疗组肺组织炎症较免疫抑制对照组明显减轻,肺间质炎性细胞浸润及肺泡腔泡沫样渗出物均明显减少.结论 黄芩苷能降低PCP大鼠血清TNF-α和sICAM-1含量,减轻肺部炎性反应.

卡氏肺孢子虫p55抗原基因片段原核表达质粒的构建与表达

目的 构建卡氏肺孢子虫p55抗原基因片段原核重组表达质粒,表达重组蛋白.方法 SD大鼠皮下注射免疫抑制剂地塞米松14周,建立卡氏肺孢子虫大鼠模型.从感染大鼠肺组织中抽提总RNA,RT-PCR克隆p55基因,测序,验证扩增产物.利用定向克隆技术将p55基因片段克隆到载体pGEX-4T-1上,重组质粒经酶切分析、PCR鉴定后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.后用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定表达产物.结果 克隆的p55基因片段为690bp,重组质粒pGEX-4T-1/690构建成功;SDS-PAGE显示目的 蛋白相对分子质量(Mr)约为62000,表达产量约占菌体蛋白的11.6%;Western blotting分析结果显示,表达蛋白能分别与谷胱甘肽(GST)抗体、卡氏肺孢子虫感染的大鼠血清发生反应.结论 构建了卡氏肺孢子虫p55抗原基因的pGEX-4T-1/690重组质粒,诱导表达的蛋白具有良好的抗原性.

从大鼠肺灌洗液中分离纯化培养卡氏肺孢子虫

目的 建立卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii,P.c)纯培养株.方法 从肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠模型离体肺脏的灌洗液中分离P.c,用改良IMDM培养基进行体外培养;以四胺银染色计数法观察虫体增殖情况:用PCR扩增培养物中P.c线粒体大亚基rRNA基因,进行基因鉴定;用透射电镜观察培养虫体的超微结构.结果 用添加s-腺苷甲硫氨酸(SAM)等辅助剂的IMDM培养基从8只PCP大鼠的肺灌洗液中分离出5个P.c纯培养株(P.c Rat1～5).分离培养的P.c可进行冷冻保存和复苏培养.培养72 h的P.c包囊可增殖19～22倍.形态、超微结构及基因序列分析证实从大鼠肺灌洗液中分离出的培养物是大鼠源性肺孢子虫.结论 从大鼠肺灌洗液中分离培养出5株大鼠源卡氏肺孢子虫.

卡氏肺孢子虫超微结构观察

目的 观察Wistar大鼠肺组织中卡氏肺孢子虫生长发育的超微结构.方法 45只雌性Wistar大鼠随机分为2组,实验组(35只)每周2次经皮下注射地塞米松(1 mg/次),对照组(10只)不作处理同步饲养.分别于首次注射地塞米松后第1～10周内,每周取两组鼠肺组织,电镜下观察卡氏肺孢子虫的感染情况及其生长发育的超微结构.结果 电镜下观察,卡氏肺孢子虫虫体主要寄生于Wistar大鼠肺泡腔内,也见于肺泡膈、肺巨噬细胞和中性粒细胞,虫体表面有管状突起,内含细胞核、线粒体、空泡、粗面内质网和丰富的核糖体.许多卡氏肺孢子虫滋养体附着于肺Ⅰ型上皮细胞,偶见附着于肺Ⅱ型上皮细胞,有的伸出1或多个较宽大的伪足,部分细胞质内发现核相关细胞器和纺锤微管.囊前期有早、中、晚3种类型,在其内发现代表减数分裂的联会复合体.包囊壁上有一增厚处,内有一孔隙.结论 卡氏肺孢子虫生活史由滋养体、囊前期和包囊等构成,包囊壁增厚处孔隙的存在提示为囊内小体逸出的一种模式.

PCR-ELISA检测大鼠卡氏肺孢子虫DNA的研究

目的建立卡氏肺孢子虫( P.c )DNA的聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定(PCR-ELISA)方法, 并探讨其应用价值. 方法实验组患卡氏肺孢子虫肺炎的SD大鼠和Wistar大鼠各 28 只, 采用PCR法扩增大鼠肺组织DNA和支气管肺泡灌洗液(BALF)DNA, 用PCR-ELISA检测其扩增产物. 28 只患病大鼠分别制作肺组织印片及BALF涂片, 姬姆萨(Giemsa)染色镜检 100 个视野中有无 P.c 包囊(或滋养体), 与PCR-ELISA检测扩增产物结果比较. 结果两种方法检测大鼠肺组织DNA阳性率及BALF DNA阳性率, 结果相同, 均分别为 96.4%(27/28)和 100%(28/28). Giemsa染色镜检 P.c 包囊(或滋养体), 结果为阳性的大鼠, PCR-ELISA检测扩增产物结果也均为阳性.阴性对照组, 两种大鼠的肺组织和BALF各 10 份标本, 均有 1 只大鼠阳性. 结论 PCR-ELISA检测大鼠卡氏肺孢子虫DNA, 敏感性较高, 特异性较好, 操作简便, 具有实用价值.

大蒜素治疗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的研究

目的研究大蒜素对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)的治疗效果.方法地塞米松连续肌肉注射Wistar大鼠8周,建立大鼠PCP动物模型.用大蒜素治疗实验大鼠,同时设复方新诺明治疗对照组和PCP模型空白对照组.通过各组大鼠肺重、肺重/体重比值、肺印片中每100个油镜视野肺孢子虫包囊均数等指标考核疗效.结果大蒜素治疗组大鼠平均肺重为1.73±0.17、肺重/体重比值为0.84±0.12,显著低于PCP模型对照组的2.31±0.35、1.25±0.35(P＜0.01).肺印片中包虫数较PCP模型对照组减少62.9%,其与复方新诺明治疗对照组接近.结论大蒜素对实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎有明显的治疗作用,治疗效果接近复方新诺明.

卡氏肺孢子虫感染大鼠肺肝脾微量元素的测定

目的研究卡氏肺孢子虫(Pc)感染对大鼠肺、肝、脾组织中6种微量元素(Ca2+、Mg2+、Fe2+、Cu2+、Zn2+、Mn2+)的影响.方法30只SD大鼠随机分为实验组和对照组.实验组每只大鼠皮下注射地塞米松1 mg/次,每周2次,诱导Pc感染.10 wk后处死大鼠,检查Pc包囊,实验组分为Pc感染组和Pc阴性组.取肝、肺、脾组织,用原子吸收分光光度计测定其微量元素的变化.结果与Pc阴性组及对照组相比较,Pc感染组肺组织Zn2+含量明显低于对照组(P＜0.05),Ca2+、Mg2+含量明显高于对照组(P＜0.05),Fe2+、Cu2+、Mn2+含量变化不明显;感染组肝组织Zn2+含量明显低于对照组(P＜0.05),Mg2+的含量增加(P＜0.05),Ca2+、Fe2+、Cu2+、Mn2+的含量变化不明显;感染组脾脏中Zn2+、Cu2+的含量明显低于对照组(P＜0.05),Ca2+、Mg2+、Fe2+、Mn2+的含量变化不明显.结论Pc感染大鼠肺、肝、脾组织微量元素的含量发生改变.

恶性肿瘤合并卡氏肺囊虫肺炎的诊断与治疗

1942年Vander Meer首次报告了由卡氏肺孢子虫(也称卡氏肺囊虫)引起的人体卡氏肺囊虫肺炎(PCP),未治疗的PCP死亡率极高.现将我院1988～2004年间10例PCP病例治疗体会报告如下.

巨噬细胞吞噬卡氏肺孢子虫的体外实验研究

应用支气管肺泡灌洗法从诱导成功的卡氏肺孢子虫(PC)肺炎大鼠中分离PC虫体后,经抗大鼠白细胞共同抗原单克隆抗体(Anti-CLA-Ab)处理使PC高度纯化,然后观察PC与小鼠和大鼠的巨噬细胞在体外的相互作用.结果显示,腹腔巨噬细胞(PMψ)和肺泡巨噬细胞(AMψ)能吞噬并降解PC虫体,PMψ和AMψ与PC相互作用后每100个Mψ吞噬成熟PC包囊数分别为5.80±0.70和4.70±0.51(P＞0.05,作用30 min时)、11.33±0.73和11.50±0.76(P＞0.05,作用60min时).经过地塞米松预处理与未经处理的AMψ,每100个吞噬成熟PC包囊数分别为4.75±0.36和5.42±0.29(30min,P＞0.05)、10.08±0.39和12.25±0.28(60min,P＜0.05).这说明糖皮质激素可抑制AMψ的吞噬功能,推测糖皮质激素诱导大鼠产生PC肺炎可能与其抑制AMψ的吞噬功能有关.结果提示:巨噬细胞在防御PC致病方面可能起重要作用.

卡氏肺孢子虫检测方法的改良

目的:为快速诊断卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)提供改良的病原学检查方法.方法:取PCP大鼠模型肺组织印片,分别作姬氏、刘-姬氏复合染色.结果:刘-姬氏复合染色示卡氏肺孢子虫包囊内有4～8个紫红色囊内小体,囊内部结构鲜明、清晰可辨、背景对比度好.结论:刘-姬氏复合染色法结果清晰、对比性好、特异性强、简便快速.