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自身γδT细胞的体外培养鉴定和治疗慢性乙型肝炎的临床观察
目的 探讨采用异戊烯焦磷酸(IPP)刺激人外周血单个核细胞(PBMCs)特异性扩增 r δT细胞,观察其在体外对HBV复制和HBeAg表达的影响,并评估应用rδT细胞过继回输治疗乙型肝炎的疗效.方法 在体外应用IPP和IL-2刺激培养人外周血PBMCs8天,采用流式细胞术检测rδT细胞百分率及细胞表面穿孔素、粒酶B、NKG2D和CD44表达量;采用ELISA法检测培养上清IFN-r、TNF-a和IL-12含量;将rδT细胞与HepG2215细胞按比例共孵育后,检测上清HBeAg和HBV DNA水平.将培养成功的rδT细胞回输治疗慢性乙型肝炎患者50例,12个月后观察疗效.结果 人外周血PBMCs在培养前rδT细胞数占5.12%,CD44表达5.13%.在培养8天后则分别升至91.27%和94.00%;rδT细胞表面穿孔素、粒酶B、NKG2D受体表达量(分别为57.1%、71.6%和71.7%)明显高于培养前(分别为0.2%、1.1%和1.3%);rδT细胞分泌IFN-r和IL-12量明显增加;扩增的rδT细胞能够抑制HepG2215细胞HBV DNA复制和HBeAg的表达;rδT细胞治疗慢性乙型肝炎患者,HBeAg转阴率为54.3%(25/46),HBV DNA转阴率为66.0%(33/50).结论 乙型肝炎患者PBMC经刺激培养获得的rδT细胞免疫功能增强,初步观察表明有一定的临床治疗作用.
关键词: 慢性乙型肝炎 rδT细胞 HepG2215细胞 免疫治疗