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激光共聚焦技术证实HCV NS5在人胎盘滋养层细胞的定位表达
目的 胎盘屏障是营养物质以及某些药物、病原体、激素等从母体进入胎儿的必经之路.体外分离培养滋养层细胞是研究其功能及母体与胎儿之间物质交换的具体分子机制的细胞学基础.本研究的目的 是探讨体外分离培养的人体胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒(HCV)后HCV NS5在滋养层细胞中的定位表达.方法 采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞,以HCV RNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染试验.应用RT-PCR法定性及定量检测感染后细胞培养上清中HCV RNA,用激光共聚焦技术观察免疫荧光染色后HCV NS5在滋养层细胞中的定位.结果 HCV感染后的细胞培养上清中可间断检测到HCV RNA,而对照组始终未检出;激光共聚焦观察显示HCV NS5主要定位于细胞核周围.结论 感染HCV的人滋养层细胞中存在HCV NS5表达.此研究为进-步深入研究HCV的母婴传播分子机制奠定了实验基础.
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牙龈卟啉单胞菌对人滋养层细胞增殖及凋亡的影响
目的:检测牙龈卟啉单胞菌感染对人胎盘滋养层细胞(HTR-8细胞)增殖以及凋亡的影响.方法:用不同感染复数(MOI)的牙龈卟啉单胞菌体标准菌ATCC 33277体外感染HTR-8细胞,未感染牙龈卟啉单胞菌的HTR-8细胞作为空白对照组.感染后,用Cell Counting Kit(cck-8)检测HTR-8细胞增殖情况,用线粒体膜电位凋亡检测试剂(JC-1)检测HTR-8细胞凋亡情况.结果:MOI=10组,感染72 h内,HTR-8细胞增殖未受抑制(P＞0.05).而MOI=100组和MOI=200组,感染24 h开始,HTR-8细胞增殖受到明显抑制(P＜0.01).并且与MOI=100组相比,MOI=200组在感染48 h(P＜0.05)和72 h(P＜0.01)时,HTR-8细胞增殖明显降低.牙龈卟啉单胞菌感染24 h,MOI=200组HTR-8细胞凋亡率显著高于空白对照组(P＜0.01).感染48 h,MOI=100组HTR-8细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.01).MOI=10组在感染24 h和48 h时细胞凋亡率与空白对照组相比差异无统计学意义.结论:在体外感染模型中,牙龈卟啉单胞菌标准菌ATCC 33277感染可抑制滋养层细胞增殖,且促进其凋亡.提示早产低体重儿与牙龈卟啉单胞菌感染引起滋养层细胞增殖和凋亡失衡有关.
