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靶向siRNA下调人结直肠癌Colo320细胞端粒长度与端粒酶逆转录酶基因表达的研究
目的:探讨发夹状shRNA封阻原癌基因(C-myc),抑制癌细胞增殖、生长的作用.方法:针对c-myc的构建发夹状shRNA的真核表达质粒,并转染人结直肠癌Colo320细胞.荧光定量RT-PCR 检测c-myc及细胞端粒酶逆转录酶的mRNA的表达,Western-blot检测c-myc、端粒酶逆转录酶(hu-man telomerase reverse transeriptase,hTERT)蛋白表达水平.Southern blot检测端粒的长度.PCR-ELISE法检测端粒酶活性.3 H-thymidine实验分析DNA合成和细胞增殖.结果:转染细胞增殖、生长皆受到抑制.同时c-myc和hTERT的mRNA和蛋白表达显著下降,端粒的长度明显缩短.端粒酶活性降低.结论:c-myc的shRNA对人结直肠癌Colo320细胞的生长增殖、端粒长度、端粒酶活性有特异性抑制作用,并呈剂量依赖关系.
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c-myc靶向siRNA抑制人结直肠癌Colo320细胞的增殖及下调hTERT基因表达的研究
目的 探讨发夹状shRNA封阻c-mye基因,抑制人结直肠癌Colo320细胞增殖、生长的状况.方法 针对原癌基因e-myc构建发夹状shRNA的真核表达质粒,并转染人结直肠癌Colo320细胞.荧光定量RT-PCR检测c-myc及细胞端粒酶逆转录酶的mRNA表达,Westemn-blot检测c-myc、hTERT蛋白表达水平.Southern blot检测端粒的长度,PCR-ELISE法检测端粒酶活性.3H-thymidine实验分析DNA合成和细胞增殖.结果 转染细胞增殖、生长皆受到抑制.同时,c-myc和hTERT的mRNA和蛋白表达显著下降,端粒的长度明显缩短,端粒酶活性降低.结论 c-myc的shRNA对人结直肠癌Co1p320细胞的增殖、端粒长度、端粒酶活性有特异性抑制作用,并呈剂量依赖关系.
