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川芎嗪对补体旁路激活致内皮细胞炎症反应的干预作用
目的 研究川芎嗪(TMP)对补体旁路激活致人微血管内皮细胞(HMEC)炎症反应的干预作用及其可能的分子机制.方法 以眼镜蛇毒因子(cobra venom factor,CVF)来激活正常人血清的补体旁路,用激活产物作用于HMEC,作用前加入不同浓度TMP预处理细胞,然后将细胞暴露在该激活产物中,采用ELISA方法检测细胞培养上清中可溶性黏附分子(ICAM-1、VCAM-1、E-selectin)和炎症介质(IL-6、TNF-α)的含量变化;双萤光素酶报告基因检测试剂盒测定NF-κB核内转录活性.结果 HMEC受补体旁路激活产物刺激后,引起黏附分子和炎症介质的表达上调,以及NF-κB核内转录活性的上调.不同浓度的TMP对上述炎症反应相关指标的上调均有干预作用,且表现出剂量依赖性.结论 TMP对补体旁路特异激活HMEC炎症反应有明显的干预作用,其机制可能与抑制NF-κB的核内转录活性有关.
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绿原酸、咖啡酸和阿魏酸对补体旁路激活致内皮细胞炎症相关分子表达的干预
目的研究绿原酸及其代谢产物咖啡酸和阿魏酸对补体旁路激活导致人微血管内皮细胞炎症反应相关分子表达的干预作用。方法采用眼镜蛇毒因子激活人血清补体旁路，将补体旁路激活产物作用于人微血管内皮细胞，分别取不同时间点的细胞培养上清，采用ELISA方法检测ICAM-1、IL-6、IL-8、t-PA、PAI-1的含量；采用不同浓度的绿原酸、咖啡酸、阿魏酸预处理内皮细胞，然后将细胞暴露于补体旁路激活产物，检测不同时间点细胞培养上清中ICAM-1、IL-6、IL-8、t-PA、PAI-1的含量变化。结果补体旁路激活产物作用于人微血管内皮细胞后，引起ICAM-1、IL-6、IL-8、t-PA、PAI-1的表达上调。50、100、250μmol·L－1的绿原酸、咖啡酸、阿魏酸对ICAM-1、IL-6、IL-8、t-PA、PAI-1的上调表达均有干预作用，其中对ICAM-1和IL-8的干预作用明显。咖啡酸表现出好的干预作用，其次为阿魏酸。结论一定浓度的绿原酸、咖啡酸、阿魏酸能有效抑制补体旁路激活引起的人微血管内皮细胞表达ICAM-1、IL-6、IL-8、t-PA、PAI-1的上调，提示绿原酸、咖啡酸、阿魏酸对微血管内皮细胞的炎症反应有一定的干预作用。
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三种化学小分子对补体旁路激活致内皮细胞黏附分子表达的干预及机制研究
目的：研究白藜芦醇( Res)、PDTC和AG4903种化学小分子对补体旁路激活致人微血管内皮细胞炎症反应相关黏附分子表达的干预作用和可能的作用机制。方法采用补体旁路激活产物作用于人微血管内皮细胞( HMEC )。TBA法检测细胞培养上清中丙二醛(MDA)的浓度,ELISA方法检测细胞培养上清中可溶性黏附分子ICAM-1、VCAM-1、E-selectin的表达,并采用多个浓度的Res、NF-κB信号通路抑制剂PDTC和JAK2信号通路抑制剂AG490预处理内皮细胞,研究3种抑制剂对细胞氧化水平和黏附分子表达的干预作用。利用Western blot检测补体旁路激活产物作用于内皮细胞对NF-κB p65磷酸化的影响及3种抑制剂的干预作用。结果 HMEC受补体旁路激活产物刺激后,导致细胞培养上清中MDA浓度升高, NF-κB p65磷酸化和黏附分子ICAM-1、VCAM-1和E-selectin的表达上调。 Res可降低细胞培养上清中MDA的浓度。 Res、PDTC和AG490能抑制NF-κB p65的磷酸化。 Res与PDTC能抑制内皮细胞黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达,对E-selectin的表达有一定的抑制作用,而AG490能够明显抑制上述3种黏附分子的表达。结论 Res、PDTC和AG490对补体旁路激活产物致内皮细胞黏附分子表达上调有不同程度的抑制作用,其作用机制与NF-κB信号通路的活化有关,而JAK2可能是一个更重要的调控位点。
