首页 > 文献资料
-
基于转基因细胞模型研究通络醒脑泡腾片对Aβ代谢的影响
目的：采用转基因细胞模型,考察通络醒脑泡腾片对Aβ生成和降解关键靶点的影响,探索其抗阿尔茨海默病的作用机制。方法体外培养SH-SY5Y-APP和SH-SY5Y-C99细胞,不同浓度的含药血清的培养液(含通络醒脑泡腾片血清0%~40%)干预48 h,采用 MTT法确定无毒浓度, LDH法检测细胞活性,ELISA法检测Aβ1-40和Aβ1-42分泌量；采用RT-PCR和Western blot检测APP基因和蛋白表达,West-ern blot法检测 APP 剪切片段 sAPPα和 sAPPβ蛋白表达；qRT-PCR、Western blot及荧光检测试剂盒分别测定 BACE1基因、蛋白水平和酶活性；Western blot检测Aβ降解酶IDE和NEP蛋白表达；体外培养SH-SY5Y,通络醒脑泡腾片不同浓度的含药血清培养液孵育48 h,MTT法检测Aβ25-35诱导后细胞存活率。结果通络醒脑泡腾片含药血清对 SH-SY5Y-APP和 SH-SY5Y-C99细胞均无明显毒性作用( P >0．05)；通络醒脑泡腾片含药血清可明显抑制SH-SY5Y-APP细胞Aβ的分泌(P<0．05),对SH-SY5Y-C99细胞Aβ分泌量无影响；对 SH-SY5Y-APP 细胞 APP 基因及蛋白水平、sAPPα及Aβ降解酶NEP和IDE蛋白表达均无明显影响( P>0．05),但对sAPPβ蛋白有明显抑制作用(P<0．05),且呈剂量依赖关系,对BACE1基因、蛋白水平、活性均有明显抑制作用(P<0．01)。此外,研究发现通络醒脑泡腾片含药血清对 Aβ25-35诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡具有保护作用( P<0．01)。结论通络醒脑泡腾片对β-分泌酶具有明显的抑制作用,并能对抗Aβ神经细胞毒性作用,提示抑制β-分泌酶和拮抗Aβ神经细胞毒性是通络醒脑泡腾片发挥抗阿尔茨海默病的主要作用机制。
