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通络醒脑泡腾片对VD模型大鼠海马细胞色素C氧化酶表达的影响
目的:考察通络醒脑泡腾片对VD模型大鼠海马细胞色素C氧化酶表达的影响.方法:2-VO永久性结扎法制作VD大鼠模型,采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力,采用免疫组织化学和图像分析技术测定海马细胞色素C氧化酶的表达.结果:通络醒脑泡腾片能显著缩短模型大鼠的逃避潜伏期,增加第一象限进入次数百分比,减少第三象限进入次数百分比,缩短总游泳路程,增强海马细胞色素C氧化酶阳性表达,显著增高其平均光密度值,与模型对照组比较差异有统计学意义.结论:通络醒脑泡腾片改善VD模型大鼠学习记忆能力与促进海马细胞色素C氧化酶的表达有关.
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以脑能量转运蛋白为靶点研究通络醒脑泡腾片的抗痴呆作用
目的:通过考察通络醒脑泡腾片干预后MID模型大鼠海马主要能量转运蛋白表达揭示其抗痴呆的作用机制.方法:建立微血栓诱发的MID大鼠模型,给予通络醒脑泡腾片干预90 d,采用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆功能,采用免疫组化和图像分析法评价大鼠海马GLUT-1、MCT-1和MCT-2的表达.结果:与模型对照组比较,通络醒脑泡腾片能显著缩短MID模型大鼠的逃避潜伏期,增加进入有效区域次数并延长有效区域停留时间,差异有统计学意义;通络醒脑泡腾片能显著促进模型大鼠海马GLUT-1、MCT-1和MCT-2表达.结论:通络醒脑泡腾片改善MID模型大鼠学习记忆功能的作用与其促进增强海马能量转运蛋白GLUT-1、MCT-1和MCT-2的表达有关.
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通络醒脑泡腾片对AD大鼠学习记忆和海马胰岛素降解酶表达的影响
目的:探讨通络醒脑泡腾片对Aβ25-35海马注射拟痴呆大鼠学习记忆和海马胰岛素降解酶表达的影响,为其防治老年痴呆提供依据.方法:建立Aβ25-35海马注射痴呆大鼠模型,将造模大鼠随机分为模型对照组、安理申组(1.4mg·kg-1)、通络醒脑泡腾片高、中、低剂量组(7.56,3.78,1.59 g· kg-1),另取海马注射生理盐水的大鼠为假手术组,10 mL·kg-1,每日1次,连续灌胃给药90 d,采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学和图像分析技术对大鼠海马胰岛素降解酶表达进行定量分析.结果:通络醒脑泡腾片能够显著缩短大鼠定向航行测试的逃避潜伏期,显著延长空间探索测试第一象限停留时间和减少第三象限停留时间,增加经过平台次数,与模型组比较有显著差异(P＜0.05),并能够显著提高海马区胰岛素降解酶平均吸光度,提高海马区胰岛素降解酶的表达,与模型组比较有显著差异(P＜0.05).结论:通络醒脑泡腾片具有提高AD大鼠学习记忆能力,促进海马胰岛素降解酶表达的作用,提示其益智作用与提高海马胰岛素降解酶活性有关.
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通络醒脑泡腾片对大鼠慢性脑缺血致学习记忆功能损伤的影响
目的:考察通络醒脑泡腾片对慢性脑缺血致学习记忆障碍模型大鼠学习记忆及海马Na+-K+-ATP酶表达的影响.方法:采用双侧颈总动脉结扎法(2-VO)制作SD种大鼠慢性脑缺血致学习记忆障碍模型.将造模成功大鼠50只随机分为模型对照组、甲磺酸双氢麦角碱片组(0.7 mg·kg-1)、通络醒脑泡腾片高、中、低剂量组(7.56,3.78,1.59 g·kg-1),另取10只假手术动物作为对照组.10 mL·kg-1·d-1连续灌胃90 d.给药第86天进行Morris水迷宫训练,第90天进行学习记忆能力测试;脑组织用10％甲醛固定,常规制片、染色后进行病理形态学观察;采用免疫组化和图像分析技术检测海马区Na+-K+-ATP酶的表达.结果:通络醒脑泡腾片各给药组与模型组比较均能显著缩短训练第5天的逃避潜伏期,显著增加第一象限进入次数、经过逃逸平台次数和进入有效区域次数(P＜0.05);病理形态学检测表明,模型组病理积分极显著高于假手术组(P＜0.01),中剂量组较模型组病理积分显著降低(P＜0.05).免疫组织化学检测显示模型组Na+-K+-ATP酶平均吸光度较假手术组显著降低(P＜0.05),高、中剂量组的平均吸光度较模型组极显著增高(P＜0.01).结论:通络醒脑泡腾片具有改善慢性脑缺血所致学习记忆障碍模型大鼠学习记忆能力、减轻海马组织病变,促进海马区Na+-K+-ATP酶表达的作用.
关键词： 通络醒脑泡腾片 学习记忆 病理形态学 Na+-K+-ATP酶 -
通络醒脑泡腾片对MID模型大鼠血液流变学,iNOS,VEGF及LDH-5的影响
考察通络醒脑泡腾片对多发脑梗死性痴呆(multi-infarct dementia,MID)模型大鼠血液流变学,iNOS,VEGF及LDH-5影响.采用微血栓栓塞法制备MID大鼠模型,将造模成功大鼠50只随机分为模型对照组,甲磺酸双氢麦角毒碱片(喜得镇)组(0.7 mg· kg-1),通络醒脑泡腾片高、中、低剂量组(7.56,3.78,1.59 g·kg-1),另取10只假手术动物作为平行对照组,连续灌胃90 d.运用Moms水迷宫检测大鼠的学习记忆能力;腹主动脉取血测定不同切变率下的全血黏度和红细胞聚集指数;采用ELISA法测定血清iNOS和VEGF的含量;采用免疫组化和图像分析技术测定MID大鼠海马LDH-5的表达.结果显示通络醒脑泡腾片能明显缩短MID模型大鼠的逃避潜伏期,增加逃逸平台进入次数,延长中环滞留时间,在1,5,30,200 S-14个切变率下,也能显著降低模型大鼠的全血黏度,红细胞聚集指数以及血清iNOS,VEGF含量和LDH-5平均光密度,与模型对照组比较有统计学意义(P＜0.05).结果表明通络醒脑泡腾片能提高MID模型大鼠学习记忆能力,改善外周血液流变学,降低iN-OS,VEGF的含量及海马LDH-5表达,进而改善脑组织能量供应.
关键词： 通络醒脑泡腾片 多发脑梗死性痴呆 血液流变学 VEGF iNOS2LDH-5 -
通络醒脑泡腾片抗痴呆的尿液代谢组学研究
通络醒脑泡腾片(TLXNET)是源自古方芎归汤加减而来的专利处方,具有改善认知功能的作用,然而关于它对Aβ25-35海马注射痴呆模型大鼠的尿液代谢产物影响及抗痴呆作用并不明确.该实验以Aβ25-35海马注射痴呆大鼠模型为研究对象,采用代谢组学技术研究空白大鼠、Aβ:5-35海马注射痴呆模型大鼠和通络醒脑泡腾片干预大鼠尿液中代谢物组时量的轨迹变化和对应关系,确定其特征性代谢标志物,并基于此标志物的代谢轨迹变化阐明通络醒脑泡腾片的抗痴呆作用.实验结果初步确定了吲哚-5,6-醌、4-羟基苯基丙酮酸(4-HPPA)、皮质醇和3-硫代乳酸等4个特征性代谢标志物,它们主要参与体内多巴胺神经系统、糖皮质激素及能量代谢途径,且通络醒脑泡腾片对4个内源性生物标记物代谢轨迹的扰动具有明显的回调作用.该实验表明Aβ25-35海马注射痴呆大鼠模型有明确的尿液代谢特征性内源性生物标志物,通络醒脑泡腾片可以通过回调其代谢轨迹的扰动而达到抗痴呆的作用.
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通络醒脑泡腾片经Nampt/SIRT1/FOXO3途径改善SAMP8小鼠的学习记忆
目的 考察通络醒脑泡腾片(川芎、当归和黄芩)对SAMP8小鼠学习记忆的影响,探究其改善认知功能作用机制.方法 将SAMP8小鼠药物干预60 d,采用Moms水迷宫评价其认知变化,随后采用ELISA法和免疫组化法分别测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、羰基化蛋白、NAD+/NADH和海马尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)、沉默调节蛋白1 (SIRT1)和叉头蛋白3(FOXO3)的表达.结果 通络醒脑泡腾片能够缩短SAMP8小鼠在隐藏平台实验中第5天的逃避潜伏期和显著增加平台象限所占时间百分比,明显增加SAMP8小鼠在空间探索实验中进入目标象限次数;能够明显提升SAMP8小鼠脑组织SOD活力和NAD+/NADH比值及降低羰基化蛋白浓度;能够显著上调SAMP8小鼠海马Nampt和SIRT1的表达,下调FOXO3的蛋白表达.结论 通络醒脑泡腾片提高SAMP8小鼠认知功能与其调节海马Nampt/SIRT1/FOXO3途径有关.
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基于转基因细胞模型研究通络醒脑泡腾片对Aβ代谢的影响
目的：采用转基因细胞模型,考察通络醒脑泡腾片对Aβ生成和降解关键靶点的影响,探索其抗阿尔茨海默病的作用机制。方法体外培养SH-SY5Y-APP和SH-SY5Y-C99细胞,不同浓度的含药血清的培养液(含通络醒脑泡腾片血清0%~40%)干预48 h,采用 MTT法确定无毒浓度, LDH法检测细胞活性,ELISA法检测Aβ1-40和Aβ1-42分泌量；采用RT-PCR和Western blot检测APP基因和蛋白表达,West-ern blot法检测 APP 剪切片段 sAPPα和 sAPPβ蛋白表达；qRT-PCR、Western blot及荧光检测试剂盒分别测定 BACE1基因、蛋白水平和酶活性；Western blot检测Aβ降解酶IDE和NEP蛋白表达；体外培养SH-SY5Y,通络醒脑泡腾片不同浓度的含药血清培养液孵育48 h,MTT法检测Aβ25-35诱导后细胞存活率。结果通络醒脑泡腾片含药血清对 SH-SY5Y-APP和 SH-SY5Y-C99细胞均无明显毒性作用( P >0．05)；通络醒脑泡腾片含药血清可明显抑制SH-SY5Y-APP细胞Aβ的分泌(P<0．05),对SH-SY5Y-C99细胞Aβ分泌量无影响；对 SH-SY5Y-APP 细胞 APP 基因及蛋白水平、sAPPα及Aβ降解酶NEP和IDE蛋白表达均无明显影响( P>0．05),但对sAPPβ蛋白有明显抑制作用(P<0．05),且呈剂量依赖关系,对BACE1基因、蛋白水平、活性均有明显抑制作用(P<0．01)。此外,研究发现通络醒脑泡腾片含药血清对 Aβ25-35诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡具有保护作用( P<0．01)。结论通络醒脑泡腾片对β-分泌酶具有明显的抑制作用,并能对抗Aβ神经细胞毒性作用,提示抑制β-分泌酶和拮抗Aβ神经细胞毒性是通络醒脑泡腾片发挥抗阿尔茨海默病的主要作用机制。
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通络醒脑泡腾片对VD模型大鼠视交叉上核生物钟基因表达的影响
目的 考察通络醒脑泡腾片对血管性痴呆(VD)模型大鼠视交叉上核生物钟基因表达的影响.方法 采用双侧结扎颈总动脉法(2-VO法)制备血管性痴呆大鼠模型,采用Morris水迷宫评价其认知功能;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组大鼠视交叉上核生物钟基因Clock、Bmal、Per2基因的表达.结果 通络醒脑泡腾片能够改善血管性痴呆模型大鼠学习记忆功能,可上调模型大鼠视交叉上核Bmal、Clock和Per2基因表达(P>0.05).结论 通络醒脑泡腾片调节血管性痴呆模型大鼠认知能力与其调节视交叉上核生物钟基因Bmal、Clock和Per1有关.
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通络醒脑泡腾片中4种成分含量的RP-HPLC法同时测定
目的 建立通络醒脑泡腾片中4种成分的含量测定方法.方法 采用反相高效液相法(RP-HPLC),分析柱:Wondasil C18-WR色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-0.5％磷酸水为流动相进行梯度洗脱,流速控制在1.0ml/min,检测波长为280nm,柱温35℃.结果 阿魏酸、黄芩苷、汉黄芩苷、藁本内酯线性范围分别为1.79～16.10ng、95.30～857.66ng、18.31 ～ 164.76ng、13.52～ 121.65ng;加样回收率分别为93.07％(RSD=1.18％)、101.64％(RSD=0.89％)、100.32％(RSD=0.98％)、95.59％(RSD=2.25％).结论 所建立的方法简便,准确,快速,可用于通络醒脑泡腾片的质量控制.
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通络醒脑泡腾片对拟痴呆小鼠中枢胆碱能神经功能的影响
目的：考察通络醒脑泡腾片对东莨菪碱致拟痴呆小鼠学习记忆及中枢胆碱能神经功能的影响。方法制备东莨菪碱致拟痴呆小鼠模型，采用避暗法和Morris水迷宫考察通络醒脑泡腾片对小鼠模型学习记忆功能的影响；采用ELISA法检测小鼠脑海马组织乙酰胆碱（Ach）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）含量，采用比色法测定AchE含量，考察通络醒脑泡腾片对小鼠模型中枢胆碱能神经功能的影响。结果避暗测定结果显示通络醒脑泡腾片可以显著延长小鼠的逃避潜伏期，并显著减少错误次数，与模型组比较差异有显著性意义（P＜0.05）； Morris水迷宫检测结果显示通络醒脑泡腾片能够显著缩短小鼠定向航行测试的逃避潜伏期和空间探索测试的第三象限停留时间，显著延长有效区停留时间，增加经过平台次数，与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；小鼠脑组织中枢胆碱能神经功能测定结果显示，模型组Ach含量显著降低， ChAT酶活性显著降低， AchE活性显著增高，与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组比较，通络醒脑泡腾片高、中、低剂量组Ach活性差异以及中剂量组ChAT活性显著增高，差异有统计学意义（P＜0.05），而通络醒脑泡腾片AchE活性有一定的降低趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。结论通络醒脑泡腾片对东莨菪碱所致小鼠拟痴呆模型学习记忆功能具有良好的改善作用，可能与提高模型小鼠中枢胆碱能神经功能、促进乙酰胆碱的合成有关。
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通络醒脑泡腾片对痴呆大鼠突触素表达的影响
目的:探讨通络醒脑泡腾片对AD大鼠学习记忆和海马突触素表达的影响,为其防治老年痴呆提供依据.方法:建立Ap25-35海马注射痴呆大鼠模型,采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学和图像分析技术对大鼠海马突触素表达进行定量分析.结果:通络醒脑泡腾片7.56g/kg、3.78 g/kg和1.89 g/kg均能够显著缩短大鼠定向航行测试的逃避潜伏期,显著延长空间探索测试第一象限停留时间和平台停留时间,增加经过平台次数,与模型对照组比较有显著的统计学意义(P＜0.05),并能够显著提高海马区突触素平均光密度,提高海马区、尤其是海马CA1区突触素的表达,与模型对照组比较有显著的统计学意义(P＜0.05).结论:通络醒脑泡腾片具有提高AD大鼠学习记忆能力,促进海马突触素表达的作用,提示其益智作用与促进海马突触素重塑有关.
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通络醒脑泡腾片对SAMP8小鼠海马的NeuN蛋白及其超微结构的影响
目的 观察通络醒脑泡腾片对快速老化小鼠亚系8(SAMP8)海马的NeuN蛋白及其超微结构的影响.方法 将SAMP8小鼠随机分为SAMP8组、安理申组、通络醒脑泡腾片组(高、中、低剂量),另取抗快速老化小鼠亚系1(SAMR1)作为对照组,分组后连续给药60d,采用Morris水迷宫和避暗法评价其学习记忆的改变;采用免疫组化法考察海马Aβ和NeuN蛋白的表达;采用电镜法考察海马的超微结构.结果 通络醒脑泡腾片能够缩短SAMP8模型小鼠的潜伏期、明显地增加平台所在象限的时间百分比和进入目标象限的次数,可显著地减少(避暗)错误次数和延长逃避潜伏期;能够下调海马Aβ的表达并上调NeuN蛋白的表达,可显著地减少核糖体的丢失,降低线粒体的肿胀度,改善海马的超微结构.结论 通络醒脑泡腾片可通过抑制Aβ沉积,提高NeuN的表达来修复神经元,保护线粒体,从而提高SAMP8小鼠的学习记忆能力.
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通络醒脑泡腾片对阿尔茨海默病大鼠海马PDH和α-KGDHC表达的影响
目的 探讨通络醒脑泡腾片(TLXN ET)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马PDH和α-KGDHC表达的影响.方法 建立淀粉样蛋白片段(Aβ 25-35)海马注射和双侧颈总动脉永久结扎两种大鼠AD模型.用Morris水迷宫法检测大鼠的学习记忆能力;免疫组化法定量分析大鼠海马丙酮酸脱氢酶(PDH)和α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)蛋白的表达.结果 与模型组比较,TLXNET能显著延长两种AD模型大鼠训练第5天的逃避潜伏期,改善空间探索行为;能显著提高大鼠海马PDH和α-KGDHC的表达,提高平均光密度值(IA);但在Aβ25-35海马注射模型中,TLXNET低剂量组的与模型组的比较无显著差异.结论 TLXNET可改善AD模型大鼠的学习记忆能力,其机制可能与促进PDH和α-KGDHC的表达,增加脑内糖代谢的水平,提高脑能量的供应有关.
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通络醒脑泡腾片对Aβ海马注射痴呆大鼠tau蛋白磷酸化关键调控蛋白CDK5和GSK-3表达的影响
目的 探讨通络醒脑泡腾片对AD大鼠学习记忆和海马CKD5和GSK-3表达的影响,为其防治阿尔茨海默病提供依据.方法 建立Aβ25-35海马注射痴呆大鼠模型,采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学和图像分析技术定量分析大鼠海马CKD5和GSK-3表达.结果 通络醒脑泡腾片能显著缩短训练第3天和第5天大鼠定向航行测试的逃避潜伏期,显著延长空间探索测试第一象限时间和有效区停留时间,缩短第三象限时间；能够显著降低海马区CDK5和GSK-3的表达,平均光密度值显著降低.结论 通络醒脑泡腾片具有提高AD大鼠学习记忆能力,抑制海马CDK5和GSK-3表达的作用,提示其益智作用与抑制海马CDK5和GSK-3有关.
