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调控Nampt对糖尿病肾病肾小球细胞表达波形蛋白的影响
目的 探讨肾小球细胞内源性Nampt对波形蛋白(vimentin)表达的影响和作用机制.方法 用C57/BL6糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏组织经包埋、固定、切片,经免疫共聚焦技术分析内源性Nampt和vimentin蛋白的表达和定位关系;在200 mmol/L葡萄糖(高糖)培养肾小球膜HBZY-1细胞至第5d时,分别用10 μmol/L FK866和1 mmol/LNMN干预,通过免疫荧光和免疫印迹方法检测内源性Nampt对NF-κB、Sirt1和vimentin表达;按高糖不同培养时间(24、48、72、96、120和144h)分组,检测细胞Nampt、NF-κB和Sirt1表达时间效应关系.结果 1)DN组小鼠肾小球明显萎缩,肾小球细胞内Nampt、vimentin蛋白表达明显增加(P＜0.01);2)应用FK866处理细胞,vimentin表达明显减少(P＜0.01);用NMN干预后,vimentin表达同样低于相应对照组(P＜0.01);3)随高糖培养细胞时间延长,Nampt和NF-κB表达明显增加(P＜0.01),相反Sirt1表达减少(P＜0.01).结论 在DN肾小球纤维化中,Nampt能够通过增强NF-κB和抑制Sirt1信号途径,影响肾小球内vimentin蛋白表达.
关键词： 糖尿病肾病 Nampt NF-κB 沉默子Sir2同源体1 波形蛋白 -
苯丙酸诺龙促进胰岛NIT-1细胞Nampt表达和胰岛素分泌
目的 探讨雄性激素苯丙酸诺龙在氧化应激条件下对胰岛细胞的作用,为2型糖尿病治疗提供理论依据.方法 将培养的NIT-1细胞按不同葡萄糖浓度(5.6、11.1、16.7和27.6 mmol/L)分为4组,分别用10 μg/mL苯丙酸诺龙处理48 h,之后用流式细胞仪检测细胞周期;用Western blot检测Nampt和FOXO1蛋白表达和用放射免疫法测定细胞胰岛素分泌.结果 用苯丙酸诺龙处理48 h后,1)低糖条件下细胞G0/G1期阻滞明显改善(P＜0.01);2)高糖条件下细胞G2/M期阻滞得到缓解(P＜0.01);3)高糖氧化应激状态下,苯丙酸诺龙促进胰岛细胞Nampt表达(P＜0.05)和抑制非磷酸化的FOXO1蛋白表达(P＜0.01),细胞分泌胰岛素增加.结论 苯丙酸诺龙能够在高浓度葡萄糖条件下改善胰岛细胞生存状况和促进胰岛素分泌,这些效应可能与促进细胞内Nampt表达和抑制FOXO1密切相关.
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抑制NAMPT表达增强K562细胞对伊马替尼的敏感性及相关机制研究
本研究探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)对K562细胞(人慢性髓系白血病细胞株)对伊马替尼敏感性的影响及其相关机制.在体外合成针对NAMPT基因的小干扰RNA(siRNA),转染K562细胞株.将转染后的K562细胞经1μmol/L伊马替尼作用48 h后,采用PI/Calcein染色方法测定细胞存活率；经不同浓度伊马替尼作用48h后,采用MTS法测定细胞增殖活性,计算半数抑制浓度(IC50).未经转染的K562细胞经1μmol/L伊马替尼作用3 -48 h后,采用Western blot方法检测NAMPT表达的变化.通过对NCBI GEO中基因表达数据的挖掘分析及Western blot方法检测,探讨NAMPT-siRNA和伊马替尼对凋亡相关基因表达的影响.采用荧光素酶报告基因技术,研究NAMPT-siRNA、伊马替尼对NF-κB转录活性的影响.结果表明,1μmol/L伊马替尼作用于K562细胞48h对NAMPT表达无明显影响.NAMPT-siRNA能够明显抑制K562细胞NAMPT的表达,再经1μmol/L伊马替尼作用后,NAMPT-siRNA干扰组细胞存活率明显降低(P＜0.05),提示抑制NAMPT表达能增强K562细胞对伊马替尼的敏感性.不同浓度伊马替尼作用后,干扰组IC50值明显降低(P＜0.05)；拟合增殖曲线在0.01 - 0.1 μmol/L伊马替尼浓度范围内斜率增大,提示在此范围内NAMPT-siRNA与伊马替尼的协同作用强.基因表达谱分析及Western blot验证结果都显示,NAMPT-siRNA和伊马替尼处理均可下调NF-κB下游因子抗凋亡基因Bcl-2表达水平,两者同时作用时效果更明显.NAMPT-siRNA及伊马替尼均能降低NF-κB转录活性,两者同时作用效果更显著.结论:伊马替尼可能并非通过调节NAMPT表达影响细胞存活；抑制NAMPT表达能增强K562细胞对伊马替尼的敏感性,可能与抑制NF-κB及其下游因子Bcl-2有关.
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绿茶多酚对肾皮质Nampt/SIRT3表达氧化应激水平影响
目的 探讨绿茶多酚(GTPs)对正常膳食大鼠肾皮质Nampt/SIRT3表达量及氧化应激水平的影响.方法 雄性Wistar大鼠(体质量160~180g)20只,经适应性喂养1w后,随机分为正常对照组(CN)和绿茶多酚干预组(GTPs),每组10只.对照组自由摄食标准饲料,绿茶多酚干预组按照体质量和进食量将绿茶多酚[200mg/(kg·bw)]添加至饲料.18w末断头处死大鼠并收集肾脏组织及全血;采用试剂盒测定血清胆固醇、甘油三酯和血糖等指标;免疫组化方法 检测肾皮质4-羟基壬烯酸(4-HNE)水平;采用Western-blotting方法 测定Nampt和SIRT3的蛋白表达水平.结果 GTPs组大鼠血低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和肾皮质4-HNE水平低于对照组(P<0.05);Nampt和SIRT3蛋白表达水平高于对照组(P<0.05).结论 绿茶多酚干预可以上调肾皮质NAMPT和SIRT3表达,进而降低氧化应激水平.
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苯肾上腺素对氧化应激损伤成骨细胞形态和Nampt的影响
背景:已有研究显示苯肾上腺素对放射性损伤的唾液腺细胞和上皮细胞等均具有保护作用,但其对过氧化氢造成氧化应激损伤的成骨细胞作用尚不清楚.目的:研究苯肾上腺素对过氧化氢造成的成骨细胞氧化应激损伤中烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase,Nampt)的调控作用.方法:原代培养成骨细胞,随机分为空白对照组、单纯H2O2处理组、苯肾上腺素组和苯肾上腺素+H2O2组(1×10-5mol/L的苯肾上腺素预处理半小时后,300 μmol/L过氧化氢作用于成骨细胞).不同时间点观察细胞,并于24 h时间点收集细胞,提取细胞总RNA和总蛋白,应用半定量RT-PCR和免疫印迹法(Western blotting)检测成骨细胞mRNA调控和蛋白的表达情况.结果与结论:①镜下观察可见单纯 H2O2处理组较空白对照组细胞数量减少、形态皱缩明显;苯肾上腺素+H2O2组在处理12,24和48 h后细胞数量较单纯H2O2处理组均明显增多;②RT-PCR结果显示24 h时间点,单纯H2O2处理组较空白对照组Nampt mRNA表达减少31.23%(P < 0.05);苯肾上腺素+H2O2组较单纯H2O2处理组Nampt mRNA表达增加206.20%(P < 0.05);③Western blotting结果显示24 h时间点,单纯H2O2处理组较空白对照组Nampt 蛋白表达减少67.98%(P < 0.05);苯肾上腺素+H2O2组较单纯H2O2处理组Nampt 蛋白表达增加152.25%(P < 0.05);④提示苯肾上腺素可缓解过氧化氢导致的成骨细胞减少和皱缩,使细胞 Nampt mRNA 和蛋白表达水平上调,Nampt 基因可能是苯肾上腺素对成骨细胞氧化应激损伤作用的相关调控基因.
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NAMPT 与恶性肿瘤的进展
烟酰胺磷酸核糖转移酶（ Nicotinamide phosphoribosyltransferase，NAMPT）是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotinamide adenine dinucleotide，NAD）补救合成途径的关键限速酶，并参与调节细胞的代谢、增殖、凋亡等生物学过程。近年来，研究发现NAMPT在多种恶性肿瘤中表达水平升高，并与恶性肿瘤的发生、发展及治疗关系密切。 NAMPT在恶性肿瘤中作用机制的研究以及NAMPT抑制剂的研究为恶性肿瘤的治疗带来了新的希望和前景。本文将NAMPT在恶性肿瘤中的研究现状做一简要综述。
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通络醒脑泡腾片经Nampt/SIRT1/FOXO3途径改善SAMP8小鼠的学习记忆
目的 考察通络醒脑泡腾片(川芎、当归和黄芩)对SAMP8小鼠学习记忆的影响,探究其改善认知功能作用机制.方法 将SAMP8小鼠药物干预60 d,采用Moms水迷宫评价其认知变化,随后采用ELISA法和免疫组化法分别测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、羰基化蛋白、NAD+/NADH和海马尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)、沉默调节蛋白1 (SIRT1)和叉头蛋白3(FOXO3)的表达.结果 通络醒脑泡腾片能够缩短SAMP8小鼠在隐藏平台实验中第5天的逃避潜伏期和显著增加平台象限所占时间百分比,明显增加SAMP8小鼠在空间探索实验中进入目标象限次数;能够明显提升SAMP8小鼠脑组织SOD活力和NAD+/NADH比值及降低羰基化蛋白浓度;能够显著上调SAMP8小鼠海马Nampt和SIRT1的表达,下调FOXO3的蛋白表达.结论 通络醒脑泡腾片提高SAMP8小鼠认知功能与其调节海马Nampt/SIRT1/FOXO3途径有关.
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烟酰胺磷酸核糖转移酶的调控因素及药物作用
烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)是生命过程中不可或缺的蛋白,具有多种生理功能.对许多疾病如心脑血管疾病、糖尿病、癌症、自身免疫性疾病等有潜在的作用.阐明各种生理、病理状态以及化合物对Nampt表达水平的改变,可为Nampt的基础性和应用件研究起到推动作用.本文就各种因素对Nampt转录、表达调控的研究进展进行了较为系统的综述.
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尼克酰胺磷酸核糖转移酶与衰老及衰老相关疾病研究进展
哺乳动物尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyl transferase,NAMPT),参与NAD的合成,也是一种细胞因子,参与调控糖代谢、炎症反应、应激耐受等多种生物学效应.研究表明,NAMPT与衰老及衰老相关疾病(例如糖尿病、肥胖、肿瘤、神经退行性疾病以及心脑血管疾病等)密切相关.这些研究成果将为临床防治衰老相关疾病提供新的思路和方法.
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过表达Nampt通过激活NF-κB诱导心肌细胞肥大
目的：研究过表达尼克酰胺磷酸核糖转移酶（nicotin-amide phosphoribosyltransferase，Nampt）对心肌细胞肥大的影响，并初步探讨NF-κB在其中的作用。方法心肌细胞给予苯肾上腺素（PE ）或过表达 Nampt 处理，采用 Real-time PCR检测Nampt、ANP和BNP的mRNA表达，利用 Western blot检测Nampt的蛋白水平，使用免疫荧光检测心肌细胞表面积，采用双荧光素酶报告基因的方法检测NF-κB依赖的转录活性。结果过表达Nampt能够诱导ANP和BNP等肥大基因的激活，增加心肌细胞表面积；过表达Nampt能够增加NF-κB依赖的转录活性，而沉默NF-κB的p65亚基能够部分取消Nampt对心肌细胞肥大的调控作用。结论过表达Nampt能够诱导心肌细胞肥大，其机制可能与NF-κB的激活有关。
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烟酰胺磷酸核糖基转移酶在结肠癌中的表达、功能及生物信息学分析
目的 探讨NAMPT在结肠癌组织中的表达并利用生物信息学分析其理化性质、蛋白结构、互作蛋白、细胞定位及对其功能进行预测分析.方法 利用TCGA数据库及即时聚合酶链锁反应(qPCR)技术验-NAMPT在结肠癌组织中的表达;利用siRNA敲除SW480细胞中NAMPT表达后测定细胞增殖能力;利用生物信息学ProtParam、Jpred4.0、Genecards、String等软件对NAMPT理化性质及功能进行预测分析.结果 在结肠癌组织中,NAMPT mRNA水平表达明显高于相应的癌旁组织;沉默SW480细胞中NAMPT后细胞增殖能力减弱;生物信息学提示NAMPT由491个氨基酸组成,为不稳定酸性亲水性蛋白质;二级结构预测发现其有14个α螺旋,17个β折叠;三级结构全球性模型质量估测(GMQE)评分0.97;预测结果显示NAMPT并无功能结构域,其仅有一个保守结构域.蛋白定位发现其在细胞外、细胞核以及胞质中均有大量表达,其参与的生物学活动主要包括参与NAD+生物合成、昼夜节律、应激、代谢反应及衰老等.结论 在结肠癌患者组织中NAMPT高表达,可参与多种生物学过程,并可通过不同途径调节肿瘤生物学行为.
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烟酰胺磷酸核糖转移酶在子宫内膜异位症中的表达及其与新生血管生成的相关性
目的 检测烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)在卵巢子宫内膜异位囊肿患者中的表达及探讨其与新生血管生成的关系.方法 选择2016年1月1日至2016年12月31日于中山大学附属第一医院妇科行腹腔镜手术的卵巢囊肿患者80例,分为卵巢子宫内膜异位囊肿组(OEM,n=50)和卵巢子宫内膜异位囊肿患者在位内膜组(EM,n=30);对照组为同期接受孕前腹腔镜下宫颈环扎术的非子宫内膜异位症患者(NEM,n=30).检测患者血清中NAMPT水平和病灶中微血管密度(MVD)以及NAMPT、VEGF、VEGFR-2的表达,对结果进行分析.结果 OEM组中的NAMPT的血清浓度比NEM组高;OEM组病灶中的NAMPT、VEGF、VEGFR-2的表达均显著高于EM组及NEM组中的在位内膜.OEM组患者血清中NAMPT水平与病灶中MVD呈正相关(r=0.81).结论 NAMPT可能通过促进内异症病灶新生血管形成参与内异症的发生和发展.
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烟酰胺磷酸核糖转移酶在扩张型心肌病中的表达及机制初探
目的 探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT)在扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)中的表达及其与DCM发生发展的关系.方法 收集2010～2013年期间经四川大学华西医院确诊的131例中国汉族DCM患者外周血,随机选择在四川大学华西医院体检中心体检的中国汉族健康人137例作为对照组.利用ELISA和Real time-PCR检测DCM组及对照组各样本NAMPT血浆蛋白及细胞内NAMPT mRNA表达水平.同时构建细胞内NAMPT过表达及空质粒转染大鼠心肌细胞系H9C2细胞,通过WST-1、细胞周期及流式细胞术检测NAMPT对H9C2细胞增殖、H2 O2诱导氧化应激前后细胞凋亡的影响.结果 DCM组血浆细胞外NAMPT蛋白水平高于对照组(P＜0.05),且不同心衰程度及左室大小之间患者血浆NAMPT蛋白水平差异有统计学意义(P均＜ 0.05).DCM组细胞内NAMPT mRNA水平低于对照组(P＜0.05).体外实验中,转染NAMPT过表达质粒后H9C2细胞增殖能力较空质粒组显著增强,S期比例增加.直接转染或转染后用H2O2诱导氧化应激前后,NAMPT过表达组H9C2存活细胞比例高于空质粒组,晚期凋亡及坏死细胞比例降低.结论 细胞外NAMPT血浆蛋白水平的高表达与外周血细胞内NAMPT mRNA水平的低表达是DCM的生物学特征之一.细胞内NAMPT降低可能是DCM发病机制中的重要因素.
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Nampt在胃癌组织中表达的临床意义及其与P-gp和Top-Ⅱα的相关性
目的:探讨Nampt在胃癌组织和细胞中的表达及其临床意义,分析Nampt与耐药相关蛋白P-gp和Top-Ⅱα的相关性.方法:运用免疫组化法检测108例胃癌组织和20例癌旁胃黏膜组织中Nampt表达,分析其表达与胃癌临床病理特征的关系以及与P-gp和Top-Ⅱα表达的相关性.体外培养细胞株GES-1、BGC823、MKN45,Western blot检测细胞株中Nampt蛋白表达.特异性抑制剂FK866干预胃癌细胞株MKN45,MTT检测细胞体外增殖能力,Western blot检测P-gp和Top-Ⅱα蛋白的表达以及对化疗药物5-FU的敏感性.结果:Nampt在胃癌组织中的表达较癌旁胃黏膜组织表达明显增高(P=0.035),Nampt阳性表达率与胃癌浸润深度、淋巴结转移及TNM进展呈正相关(P值分别为0.001、0.011、0.001);Nampt在胃癌组织中阳性表达与P-gp阳性表达呈正相关性,与Top-Ⅱα阳性表达呈负相关性(P值分别为0.000、0.000).胃癌细胞中Nampt蛋白表达含量较GES-1细胞中高,高浓度的FK866能明显抑制胃癌细胞的体外增殖能力.高浓度的FK866作用后胃癌细胞中P-gp蛋白表达含量减少,Top-Ⅱα蛋白表达含量增加.低浓度FK866能增加5-FU对胃癌细胞的增殖抑制率.结论:Nampt在胃癌组织中过表达,可能参与了胃癌的进展.Nampt蛋白表达与耐药相关蛋白P-gp、Top-Ⅱd蛋白表达有一定的相关性,Nampt可能参与了胃癌化疗多药耐药的发生.其机制可能与调控P-gp、Top-Ⅱα蛋白表达有关.Nampt的特异性抑制剂FK866可能是一种新的化疗联合药物.
