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植物雌激素α-ZAL对oxLDL诱导人内皮细胞中ET-1基因表达的抑制作用及其抗氧化机制
目的 通过氧应激信号转导通路探讨植物雌激素α-ZAL对oxLDL诱导人脐静脉内皮细胞中ET-1基因表达的抑制作用.方法 用荧光探针DCF检测内皮细胞活性氧的含量;采用RT-PCR方法对ET-1mRNA的表达进行分析,运用Western Blot法测定了ERK、pERK和c-jun/AP-1蛋白的表达;同时测定了内皮细胞上清液中ET-1的分泌的变化,利用瞬时转染技术观察了内皮细胞的AP-1报告基因的活性.结果 实验结果表明α-ZAL对oxLDL诱导的ET-1的分泌有抑制作用(P＜0.05),它可能通过抗氧化作用阻断oxLDL诱导的内皮细胞氧应激的产生;并能抑制oxLDL诱导的内皮细胞AP-1的激活(P＜0.05).结论 研究发现α-ZAL可能是通过氧应激激活细胞外信号调节激酶,进一步通过调节ET-1基因上的核转录因子AP-1结合位点来抑制oxLDL诱导内皮细胞的ET-1基因表达.
关键词： 植物雌激素α-ZAL ET-1 氧应激 核转录因子AP-1 -
圈套寡核苷酸抑制NIH3T3细胞α2Ⅰ型胶原基因表达的研究
目的研究激活剂蛋白1(activator protein-1,AP-1)圈套寡核苷酸(decoy-oligodeoxynucleotides,Decoy-ODNs)对成纤维细胞α2Ⅰ型胶原表达的影响,探讨病理性瘢痕的基因治疗. 方法设计合成针对AP-1的Decoy-ODNs,用阳离子脂质体转染NIH3T3细胞,观察Decoy-ODNs在细胞中的分布;用凝胶迁移变动分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究Decoy-ODNs对AP-1的抑制作用,采用RT-PCR观察其对细胞胶原合成的影响. 结果 AP-1的Decoy-ODNs可在体外竞争抑制核转录因子AP-1的活性;阳离子脂质体可以将Decoy-ODNs 转染进入细胞浆及细胞核从而发挥作用;Decoy-ODNs作用24 h后,NIH3T3细胞α2Ⅰ型胶原mRNA的表达明显降低. 结论 Decoy-ODNs可以通过拮抗核转录因子AP-1的活性而抑制α2Ⅰ型胶的表达.
