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  • 过敏性疾病关键启动因子在人角质形成细胞中表达的适宜刺激方法探索

    作者:刘海亮;包凯帆;江小燕;魏筱;于曦;陶羽;王晓钰;王燕;洪敏

    目的:研究不同刺激条件对人角质形成细胞 HaCaT细胞中 TSLP、IL-33表达水平的影响,探讨过敏性疾病中关键启动因子 TSLP、IL-33体外表达细胞模型的佳刺激方法。方法应用角质形成细胞无血清培养液(K-SFM)体外培养 HaCaT 细胞,给予不同刺激剂,筛选出明显促进 HaCaT细胞中 TSLP 和 IL-33表达的刺激剂。进而考察单独与联合刺激剂时的量效关系,后对选出的刺激剂进行时效关系考察。TSLP 和 IL-33表达水平采用 ELISA 和免疫荧光法检测。结果(1)Poly(I:C)与 TNF-α两种刺激剂单独使用时均能明显刺激 HaCaT 细胞分泌 TSLP 和 IL-33,其余刺激剂在本实验浓度范围内未见明显差异。(2)Poly(I:C)100 mg· L -1与 TNF-α20μg·L -1联合刺激对 HaCaT 细胞表达 TSLP和 IL-33的促进作用为明显。(3)对 Poly(I:C)100 mg· L -1与 TNF-α20μg·L -1联合刺激 HaCaT 细胞的时效关系考察发现,刺激12 h HaCaT 细胞中 TSLP 和 IL-33的表达水平高。结论不同刺激剂和刺激时间对体外刺激 HaCaT细胞表达细胞因子 TSLP 和 IL-33的效应不同,其中以 Poly (I:C)100 mg·L -1与 TNF-α20μg·L -1联合刺激 HaCaT 细胞12 h 后,TSLP 和 IL-33的表达水平升高为明显。该结果为过敏性疾病的病理机制及药物作用研究提供了合适的方法。

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