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绵羊脑多头蚴病45m基因在多头绦虫和细粒棘球绦虫不同发育阶段同源性的比较
目的 研究绵羊多头蚴病45M重组蛋白的同源性.方法 将多头蚴的45m基因片段亚克隆到pET41b表达质粒,构建45m-pET41b原核表达系统,诱导表达45M重组蛋白,制备小鼠高免血清,进行免疫印迹试验(Western blot);运用RT-PCR的方法,从多头绦虫的成虫cDNA中分离到45mA.结果 45M蛋白的高免血清可被细粒棘球绦虫不同发育阶段的天然抗原所识别,均在63kD处发生交叉反应;从多头绦虫的成虫cDNA中分离到45m基因的同源基因,命名为45mA(GenBank 号为EU326106),45m和45mA的核酸序列和蛋白序列分别有86% 和76%的同源性;45M和45MA蛋白与细粒棘球蚴的保护性蛋白Eg95有57%的氨基酸同源性.结论 提示45m抗原分子在多头绦虫和细粒棘球绦虫的不同发育阶段均存在,为45M蛋白的免疫原性的分析提供了宝贵的资料.
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多头蚴病保护性基因的分离与表达
目的 分离与表达多头绦虫(Taenia multiceps)基因45m,确定其免疫原性及在虫体不同发育阶段的表达.方法 通过对绦虫同源基因序列分析设计引物,运用RT-PCR的方法,首次从绵羊多头绦虫的幼虫阶段分离到新的基因45m,将其克隆到pET41b表达载体中,获得了含正确读码框的重组质粒,将表达蛋白初步运用于动物免疫试验.结果 45m基因长度为698bp,编码232个氨基酸.表达的重组蛋白分子量约为63kD,表达产量可达100～120mg/L.其蛋白序列与已知抗羊带绦虫(45W)和牛带绦虫保护性抗原的同源性分别为89%和85%.本动物绵羊的免疫接种试验表明该蛋白可有效激起机体的抗原抗体反应,其抗血清可以与多头绦虫的成虫和幼虫抗原总蛋白在63kD处发生特异性反应.结论 45m蛋白可能具有较强抗原性,该蛋白在虫体的成虫和幼虫阶段均有表达,推测认为45m可能成为多头蚴病的候选疫苗.
