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多头蚴病保护性基因的分离与表达
目的 分离与表达多头绦虫(Taenia multiceps)基因45m,确定其免疫原性及在虫体不同发育阶段的表达.方法 通过对绦虫同源基因序列分析设计引物,运用RT-PCR的方法,首次从绵羊多头绦虫的幼虫阶段分离到新的基因45m,将其克隆到pET41b表达载体中,获得了含正确读码框的重组质粒,将表达蛋白初步运用于动物免疫试验.结果 45m基因长度为698bp,编码232个氨基酸.表达的重组蛋白分子量约为63kD,表达产量可达100~120mg/L.其蛋白序列与已知抗羊带绦虫(45W)和牛带绦虫保护性抗原的同源性分别为89%和85%.本动物绵羊的免疫接种试验表明该蛋白可有效激起机体的抗原抗体反应,其抗血清可以与多头绦虫的成虫和幼虫抗原总蛋白在63kD处发生特异性反应.结论 45m蛋白可能具有较强抗原性,该蛋白在虫体的成虫和幼虫阶段均有表达,推测认为45m可能成为多头蚴病的候选疫苗.
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保护性基因A20在血管内皮细胞中的诱导表达
目的:研究人Th2细胞因子对牛主动脉内皮细胞(BAEC)诱导表达保护性基因A20的影响,探讨人Th2细胞因子对异种VEC具有保护效应的机制.方法:建立BAEC的体外培养体系,用浓度为20 μg/L的各Th2细胞因子(hIL-4、hIL-10、hIL-13)分别孵育BAEC 2 h后,再与肿瘤坏死因子α(TNF-α、4 μg/L)共孵育24 h后收集细胞;应用RT-PCR方法检测各组BAEC中A20 mRNA的表达.结果:用Th2细胞因子在一定浓度内预处理BAEC后,能明显诱导BAEC表达保护性基因A20.结论:Th2细胞因子对BAEC的保护作用与Th2细胞因子诱导保护性基因A20在BAEC中的表达有关.