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花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EET抑制脂多糖诱导的内皮细胞凋亡
目的研究花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢产物-表氧化二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛主动脉内皮细胞(bovineaortic endothelial cells,BAECs)凋亡的影响.方法原代分离培养BAECs.分别在细胞培养基中加入8,9-,11,12-,和14,15-EET1 h后,用LPS(100 ng/ml)诱导内皮细胞凋亡.用MTT法检测LPS对BAECs的毒性作用,再通过细胞形态学(吖啶橙/溴化乙锭染色)和流式细胞仪计数检测其凋亡变化.结果LPS对BAECs的毒性作用呈剂量依赖性和时间依赖性.LPS可明显诱导BAECs凋亡,但8,9-,11,12-,和14,15-EET干预的BAECs凋亡细胞数分别为(37.03±3.014)%、(33.45±7.918)%和(35.75±7.858)%明显少于溶媒对照组(47.33±3.154)%.结论这些结果证明了花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物EETs能明显的抑制LPS诱导的BAECs凋亡.这表明细胞色素P450表氧化酶可能有保护心血管系统,防止其受到炎症损伤和粥样硬化的作用.
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人Th2细胞因子对牛主动脉内皮细胞表达黏附分子的影响
目的研究人Th2细胞因子对活化的牛主动脉内皮细胞(BAECs)表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和E-选择素(E-selectin)的影响,为Th2细胞因子应用于减轻排斥反应、诱导异种移植免疫耐受提供实验依据.方法用不同浓度(2、5、10、20、40ng/ml)的Th2细胞因子(白介素-4、白介素-10、白介素-13)分别孵育BAECs 2h后,再与TNF-α(4ng/ml)共孵育6h或18h;应用细胞-酶联免疫吸附法检测细胞表面的E-selectin和ICAM-1的表达.用MTT法测定药物对细胞活性的影响.结果用一定浓度的Th2细胞因子预处理BAECs后,能明显抑制TNF-α诱导的E-selectin与ICAM-1的表达,并呈现一定的剂量依赖性.MTT法测定表明,各实验组细胞活性与对照组无明显差异.结论 Th2细胞因子能明显抑制TNF-α活化的BAECs表达E-selectin与ICAM-1;Th2细胞因子对BAECs有一定的保护作用.
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没食子儿茶素没食子酸酯抑制牛主动脉内皮细胞增殖和对细胞周期分布的影响
背景:血管内皮细胞在肿瘤血管生成中起关键作用,没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)可抑制内皮细胞生长和增殖,但其作用机制仍不清楚.目的:观察没食子儿茶素没食子酸酯对牛主动脉内皮细胞增殖和细胞周期分布的影响.设计、时间及地点:以细胞为观察对象的随机分组实验,于2006-08/2008-05在广州医学院完成.材料:出生1 d、未哺乳的新生牛,取主动脉内皮细胞进行原代培养.方法:将指数生长期密度为5×107L-1的牛主动脉内皮细胞接种于96孔培养板,实验分为2组:实验组和对照组分别加入以培养基RPMI 1640配制的不同浓度的EGCG 180 μL(终浓度为5,10,20,40,80 g/L)及等体积不含EGCG的培养基,全自动酶标仪上测定不同时间3,6,12,24,36 h各孔吸光度值,并计算细胞生长抑制率.选择适当的药物浓度和作用时间点进行EGCG抑制作用的半数抑制浓度(IC50)实验.收集对数牛长期的牛主动脉内皮细胞,实验组加入不同浓度(10,20,30,40 g/L)的EGCG,对照组加入不含药物的培养基,Multicycle软什分析G1/G0期、S期和G2/M期细胞所占比例.主要观察指标:①不同剂量EGCG在不同时间点对牛主动脉内皮细胞生长、增殖的影响.②运用直线回归分析EGCG对牛主动脉内皮细胞抑制的IC50.③流式细胞仪检测EGCG对内皮细胞周期分布的影响.结果:①EGCG呈剂量及时间依赖性抑制内皮细胞的增殖:EGCG作用12 h后,细胞抑制率达高峰,此后其抑制率逐渐下降(P<0.05);从10 g/L起,EGCG对内皮细胞增殖的抑制效应逐渐增加,40 g/L即达高峰(P<0.05);40 g/L与80 g/L剂量组相比,抑制率无明显差异(P>0.05).②在3,6,12,24 h和36 h等时间点EGCG的IC<50分别为23.14,18.79,13.23,14.19,17.45 g/L,IC50在12 h达高峰,时间继续延长,作用并不增加.③各组G2/M期细胞所占比率无明显差异(P>0.05).S期细胞比率由(58.02±1.21)%下降为(27.62±3.12)%,其中30 g/L和40 g/L剂量组与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.01).G0/G1期细胞比率由(29.22±3.21)%上升到(62.32±4.11)%,其中30 g/L和40 g/L剂量组与对照组相比,差异有显看性意义(P<0.01).结论:EGCG在体外能有效抑制牛主动脉内皮细胞增殖,且使其周期主要受阻于G0/G1期,可能是其抑制内皮细胞增殖的机制之一.
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人白介素10对异种内皮细胞保护作用的研究
目的:研究人白介素10(hIL-10)对活化的牛主动脉内皮细胞(BAECs)的保护作用,为hIL-10用来减轻异种排斥反应、诱导异种移植免疫耐受提供实验依据.方法:用不同浓度的hIL-10(2、5、10、20、40 ng/ml)孵育 BAECs 2小时后,再与肿瘤坏死因子α(TNF-α,4 ng/ml)共孵育6小时或18小时;应用细胞-酶联免疫吸附分析方法(Cell-ELISA)检测细胞表面的E-selectin和ICAM-1的表达.用MTT方法测定药物对细胞活性的影响.结果:用hIL-10在一定浓度内预处理BAECs后,能明显抑制TNF-α诱导的E-selectin与ICAM-1的表达,并呈现一定的剂量依赖性.用MTT方法测定细胞活性的实验表明,各实验组细胞活性与对照组无明显差异性.结论:hIL-10能明显抑制TNF-α活化的BAECs表达E-selectin与ICAM-1;hIL-10对BAECs有一定的保护作用.
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5-芳基吖啶酮衍生物对离体细胞作用的实验研究
1 材料与方法①实验动物及细胞株:G57小鼠2只,雌雄不限,体重18 g,由中国医学科学院实验动物研究中心提供;小公牛主动脉内皮细胞、白血病HL-60细胞、食道癌细胞、人结肠癌HCT-8 细胞均由中国医学科学院药物研究所提供.
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牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白对牛主动脉内皮细胞存活的影响
目的:探讨牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白对体外培养牛主动脉内皮细胞(BAECs)存活的影响.方法:盐析法提取牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白;不同浓度的胞外蛋白(200、300、400、500、600μg/mL)分别作用于体外培养的BAECs 24 h,对照组为无细菌胞外蛋白作用的BAECs;另外,用400μg/mL胞外蛋白分别作用于BAECs 6、12、24、36h,对照组细胞同样培养6、12、24、36 h,比较实验组与对照组BAECs存活率的变化;采用台盼蓝染色法检测BAECs存活率.采用SPSS 10.0软件包对数据进行独立样本t检验.结果:当作用于BAECs的牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白浓度在200～600μg/ml.范围内时,BAECs存活率均低于对照组(P<0.05),且随细菌蛋白浓度增加而降低;在36 h内,随着时间的延长,实验组和对照组的BAECs存活率均有下降,但实验组降低的幅度大于对照组(P<0.05),显示细菌胞外蛋白对BAECs存活率的影响具有时间依赖性.结论:牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白可导致体外培养的牛主动脉内皮细胞存活率降低,并呈现剂量和时间依赖性.
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人白介素-13对牛主动脉内皮细胞表达黏附分子的影响
目的研究人白介素-13(hIL-13)对牛主动脉内皮细胞(BAECs)表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和E-选择素的影响,为hIL-13应用于诱导异种移植免疫耐受、减轻异种移植排斥反应提供实验依据. 方法用不同浓度的hIL-13(2、5、10、20及40 ng/ml)孵育 BAECs 2 h后,再与肿瘤坏死因子-α(TNF-α, 4 ng/ml)共孵育6 h或18 h; 应用细胞-酶联免疫吸附分析方法(Cell-ELISA)检测BAECs表面的E-选择素和ICAM-1的表达; 用MTT方法测定hIL-13对BAECs活性的影响. 结果用hIL-13在5～20 ng/ml浓度内预处理BAECs后,能明显抑制TNF-α诱导的E-选择素与ICAM-1的表达,并呈现一定的剂量依赖性(P＜0.01).经不同浓度hIL-13处理的BAECs活性与未经hIL-13处理者相比差异无统计学意义. 结论 hIL-13能明显抑制BAECs表达E-选择素与ICAM-1,诱导异种移植的免疫耐受,且hIL-13对BAECs无损伤作用.
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保护性基因A20在血管内皮细胞中的诱导表达
目的:研究人Th2细胞因子对牛主动脉内皮细胞(BAEC)诱导表达保护性基因A20的影响,探讨人Th2细胞因子对异种VEC具有保护效应的机制.方法:建立BAEC的体外培养体系,用浓度为20 μg/L的各Th2细胞因子(hIL-4、hIL-10、hIL-13)分别孵育BAEC 2 h后,再与肿瘤坏死因子α(TNF-α、4 μg/L)共孵育24 h后收集细胞;应用RT-PCR方法检测各组BAEC中A20 mRNA的表达.结果:用Th2细胞因子在一定浓度内预处理BAEC后,能明显诱导BAEC表达保护性基因A20.结论:Th2细胞因子对BAEC的保护作用与Th2细胞因子诱导保护性基因A20在BAEC中的表达有关.
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人白介素- 4对牛血管内皮细胞保护作用的研究
目的: 研究人白介素-4(Hil-4)对经TNF-α活化的牛主动脉内皮细胞(BAEC)的保护作用.方法:用不同浓度的Hil 4与BAEC共孵育2 h后,再与4 μg/L的TNF-α共孵育6 h或18 h.应用细胞-ELISA方法, 检测BAEC表面的E选择素和ICAM-1的表达; 用MTT比色法测定Hil-4对BAEC活性的影响.结果: 在一定浓度内用Hil-4预处理BAEC后, 能明显抑制TNF-α诱导活化BAEC上的E选择素与ICAM-1的表达,并呈现一定的剂量依赖性.用MTT比色法测定BAEC活性的实验表明,各实验组BAEC的活性与对照组无明显差异性.结论: Hil-4能明显抑制TNF-α诱导活化的BAEC表达E选择素与ICAM-1; Hil-4对BAEC的正常功能具有一定的保护作用.
