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CYP3A29稳定表达HepG2细胞株的建立及其硝苯地平代谢活性鉴定
目的 建立稳定表达Bama小型猪CYP3A29的HepG2细胞株.方法 通过总RNA提取、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A29的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体PMD18-T上得到重组质粒pMD-3A29;以测序正确的重组质粒pMD-3A29为模板,采用PCR扩增CYP3A29基因并在其3′添加组氨酸标签,扩增产物经 BamHI/XhoI双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A29基因定向克隆至pcDNA3.1(+)中,并测序验证;将测序正确的CYP3A29基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,经RT-PCR及Western-blot分析及探针药物硝苯地平对重组细胞进行活性鉴定.结果 与HepG2相比,HepG2-CYP3A29细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性.结论 成功建立了稳定表达CYP3A29的HepG2细胞株,可用于相关药物代谢研究.
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肝细胞癌cathepsin L表达分析
目的 探讨cathepsin L蛋白在肝细胞癌中的表达及其与肿瘤临床病理特征的关系.方法 58例肝细胞癌中病理分级高分化18例、中分化18例、低分化22例;临床分期Ⅰ+Ⅱ期26例、Ⅲ+Ⅳ期32例.采用免疫组织化学染色、RT-PCR法检测cathepsin L表达,结合患者临床病理指标及预后进行分析.结果 cathepsin L表达阳性率为72.4%(42/58),不同病理分级、临床分期及转移分组cathepsin L表达阳性率差异显著.cathepsin L mRNA检出阳性率65.5%(38/58),cathepsin L mRNA的表达与肝细胞癌的病理分级、临床分期及淋巴转移有相关性.结论 cathepsin L 在肝细胞癌的生长浸润、侵袭转移中发挥重要作用,可作为肝细胞癌预后判断的客观指标之一.
