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日本血吸虫Mago nashi基因RNA干扰系统的构建及鉴定
目的 构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体.方法 设计及化学合成日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的短发夹结构的寡核苷酸,通过退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切的pSUPER质粒连接,构建表达shRNA的重组质粒.结果 经酶切及测序证实针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体pSUPER构建成功.结论 成功构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体,为进一步研究对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因RNA干扰作用及该基因功能奠定基础.
关键词： 日本血吸虫 Mago nashi样蛋白 RNAi siRNA shRNA -
Mago nashi:一个日本血吸虫性别决定基因的发现与鉴定
目的运用免疫学方法筛选日本血吸虫(中国大陆株)童虫cDNA文库,寻找血吸虫新基因,并克隆和鉴定一个日本血吸虫决定性别的Mago nashi样蛋白基因.方法用混合的血吸虫感染者血清免疫学筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,随机挑取阳性重组克隆进行测序,以获得血吸虫基因,并通过BLAST程序进行比较及同源性分析,根据分析结果设计合成引物,用PCR法扩增出日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因(SiM)编码序列,将其克隆入pGEM-T载体和pBK CMV载体,用双酶切、以质粒为模板进行PCR扩增和测序进行鉴定.结果本研究共挑取7个阳性克隆,通过测序获得了5个有表达序列标签(Expressed Sequence Tag.EST)价值的序列,并进行了同源性分析;用PCR法扩增出大小为441bp SjM开放阅读框,重组质粒pGEM-SjM和pBK CMV-SjM经双酶切均可获得一条为PCR产物一致的DNA片段.结论本实验获得了5个有EST价值的序列,并成功地克隆了其中SjM编码基因.
关键词： 日本血吸虫 cDNA文库 免疫学筛选 Mago nashi样蛋白 基因克隆
