首页 > 文献资料
-
长爪沙鼠和新西兰白兔源肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2序列的测定与分析
目的 测定长爪沙鼠及新西兰白兔源肺孢子虫的ITS1-5.8S rDNA-ITS2序列,并与大鼠源肺孢子虫的相应序列进行比较分析.方法 用地塞米松免疫抑制法诱导长爪沙鼠和新西兰白兔感染肺孢子虫;制作肺印片进行瑞-姬氏复合染色,通过镜检初步了解感染情况;提取肺孢子虫总DNA,设计合成引物进行PCR扩增;纯化扩增产物后克隆测序;与登录GenBank的大鼠源肺孢子虫相关序列进行比较分析. 结果 长爪沙鼠源肺孢子虫的ITS1、5.8S rDNA和ITS2基因序列长分别为158、157和172bp, 新西兰白兔源肺孢子虫的相应序列分别为129、158和178bp. 结论 本实验测得的长爪沙鼠及新西兰白兔源肺孢子虫的ITS1-5.8S rDNA-ITS2序列以往未曾报道,此结果为肺孢子虫的遗传学研究提供了新的资料.
-
大鼠卡氏肺孢子虫ITS 1-5.8S rDNA-ITS2的巢式PCR检测及基因序列的测定
目的 探讨ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR检测卡氏肺孢子虫的应用价值并测定其基因序列.方法 采用地塞米松免疫抑制法诱导SD大鼠感染肺孢子虫;制作肺印片、肺组织匀浆液及支气管肺泡灌洗液(BAL)涂片进行六亚甲基四胺银(GMS)染色镜检;提取肺孢子虫DNA进行巢式PCR扩增,测序后与GenBank的不同宿丰肺孢子虫相关序列进行比较分析.结果 用ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR法均能检测出实验感染大鼠BAL和肺组织卡氏肺孢子虫DNA,阳性率为100%(10/10),比较BAL标本、肺印片和肺组织匀浆液GMS染色法的检出效率,BAL低,肺组织匀浆液高.其中20%(2/10)大鼠的BAL标本用GMS染色法未能检测出,但用巢式PCR方法 均能成功扩增;所测SD大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列长度为516bp,ITS1、5.8S rDNA、ITS2基因片段分别为198、158、160bp,与GenBank的大鼠(L27658)、小鼠(AY532651)和长爪沙鼠(AY875972)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因的同源性分别为96%(452/467)、88%(275/310)、95%(152/159),其变异位点多在ITS1和ITS2基因片段.结论 ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR检测卡氏肺孢子虫敏感性高、特异性强,可作为早期诊断肺孢子虫肺炎方法,特别适用无创性标本的检测;成功获取SD大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基冈序列,与不同宿主比较其5.8S rDNA较保守,ITS1和ITS2基因变异较大,适合基因分型和系统进化研究.
