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长片段DNA文献资料
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5种多房棘球绦虫续绦期幼虫的制备RNA方法比较及长片段DNA RT-PCR扩增方法研究
目的探讨从多房棘球绦虫续绦期幼虫制备RNA的佳方法,研究逆转录PCR扩增DNA长片段目的基因的方法.方法应用改良的琼脂糖核酸电泳方法和RT-PCR技术比较观察了5种商品化RNA/mRNA提取试剂/试剂盒用于提取多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA的效果;用琼脂糖凝胶电泳方法观察比较了不同的DNA聚合酶用于RT-PCR扩增长片段EMⅡ/3(1.72kb)和EM10(1.76kb)的效果.结果总RNA提取试剂盒(RNeasy Total RNA Kit)提取的多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA电泳显示出清晰的28 S、18 S rRNA条带和弥散于0.8kb至20kb之间未降解的mRNA,是唯一能逆转录扩增出单一目的条带的核酸提取物.Taq DNA聚合酶与高保真DNA聚合酶Pfu的混合制剂Taq Plus应用于RT-PCR可扩增出大量1720bp和1760bp单一目的基因.结论总RNA提取试剂盒(RNeasy Total RNA Kit)对多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA的提取效果好;Taq Plus适合用于RT-PCR扩增长片段目的基因.
