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两法提取皮质骨Ⅰ型胶原的比较研究
[目的]通过对两种方法提取的骨胶原产量及特性的比较,推荐-种较为理想的提取皮质骨Ⅰ型胶原的方法.[方法]以猪皮质骨为原料,去除软组织后劈成小骨块,经酒精梯度脱水、无水乙醚脱脂、盐酸脱钙、甲醇:氯仿(1:1,v/v)再脱脂处理后,骨块软化.然后将软化的骨块在高速粉碎机上粉碎成脱钙骨基质粉.分别采用传统的碱溶法和自建的增强酶解法对脱钙骨基质粉处理,经溶解、离心、透析、冻干等操作提取皮质骨胶原.后对增强酶解法所得产物进行鉴定,并对两种提取方法的效率及得到的产物的外观、黏度、凝胶固化性进行比较.[结果]增强酶解法所得胶原的氨基酸组成、蛋白电泳、相对分子量大小、大光吸收波长均符合Ⅰ型胶原特征;和碱溶法比较,提取率由(57.8±4.96)%提高到(94.04±0.55)%;其相同浓度(0.03%,w/v)醋酸溶液黏度测定,增强酶解法为3.71,碱提法为2.81;在37.0℃,pH值7.35～7.45条件下行凝胶固化性检测,增强酶解法所提胶原凝胶液约10 min可固化形成凝胶块,而碱提法所提胶原的溶液仍为黏性液体.[结论]增强酶解法提取的骨胶原是Ⅰ型胶原;相对于碱提法,该法提取效率高,所得胶原纯度高、黏性好、固化性好,是一种较好的从猪皮质骨中制备Ⅰ型胶原的方法.
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Ⅰ型骨胶原膜的制备及生物相容性研究
目的 观察自创增强酶解法提取的皮质骨胶原所制胶原膜的生物相容性,为利用该胶原制备支架材料提供可行性依据.方法 以新鲜猪皮质骨为原料,通过增强酶解法提取技术获得Ⅰ型胶原,再将胶原制成戊二醛交联或不交联的胶原膜.后将胶原膜与hMSC共培养观察细胞相容性或埋植到兔肌袋里观察组织相容性和降解情况.结果 胶原膜无明显细胞毒性,hMSC增殖迅速,无明显受抑制现象.埋植试验,未交联的胶原膜1周时即明显降解,可见血管长入,2周末即被完全吸收;交联后的胶原膜2周时开始明显降解,4周左右才完全被吸收.结论 增强酶解法提取的骨胶原制备的胶原膜具有良好的细胞相容性、组织相容性和降解性.适当浓度戊二醛交联可提高胶原的强度而不引起明显的毒性.
