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内皮细胞与滋养细胞体外共培养模型的建立
从弓状绒毛分离出的绒毛外滋养细胞(extravil-lous cytotrophoblasts,EVCT)侵入子宫螺旋动脉并使其重建对正常妊娠维持起关键作用,妊娠16～18周,滋养细胞侵入子宫螺旋动脉,子宫螺旋动脉内皮细胞及平滑肌细胞发生程序性死亡,血管壁弹性纤维变性形成纤维蛋白样物质,使血管壁阻力发生改变,形成高流、低阻的循环特点,保证胎儿胎盘足够的血循环以维持正常妊娠[1].
关键词： 绒毛外细胞滋养层细胞 内皮细胞 共同培养 侵袭 Transwell -
H2O2通过ERK通路抑制绒毛外细胞滋养层细胞的侵袭能力
目的 研究活性氧过氧化氢(H202)对绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)侵袭行为的影响及其信号传导机制.方法 建立EVCT体外培养模型,利用Transwell细胞侵入系统检测EVCT的体外侵袭作用,应用Western blot法评价细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)的活性变化,使用CCK-8测定细胞的生长状况.结果 与对照组比较,15 μmol/LH202和50 μmol/L PD98059均可显著抑制EVCT的侵入指数(分别为43.3±4.7,49.3±7.0)(P＜0.01),同时降低EVCT的ERK1/2磷酸化水平(P＜0.01),但并不影响EVCT的细胞活力(P＞0.05).结论 H202可能通过抑制ERK1/2的激活,进而影响EVCT的侵袭行为,参与子痫前期的发病机制.
关键词： 过氧化氢 绒毛外细胞滋养层细胞 侵袭能力 细胞外信号调节蛋白激酶 -
Luminex液相芯片技术测定人早孕滋养层细胞及蜕膜细胞中基质金属蛋白酶的表达
目的 研究人正常早孕滋养层细胞与蜕膜细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达特点,探讨子宫内膜蜕膜化进程中MMPs的变化及对胚胎着床的影响.方法 收集正常妇女分泌期子宫内膜及人正常早孕绒毛和相应蜕膜标本各5例,分别进行离体培养,鉴定其纯度在98%以上后,收集培养上清液,利用Luminex(LumAvidin Beads)测定培养上清液中MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-12、MMP-13)蛋白表达的变化,分析MMPs在不同培养条件下的表达差异及表达之间的相关性.结果 ①在不同培养条件下,MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9均有表达,MMP-12及MMP-13分别在ESC及DSC中无表达,且MMP-8、MMP-12、MMP-13表达均低.②与子宫内膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在DSC,EVCT中表达均降低,降低有显著性差异(P＜0.05),而MMP-2、MMP-8、MMP-9在DSC,EVCT中则显著升高,升高有显著性差异(P＜0.05).且在蜕膜细胞中,MMP-1、MMP-3、MMP-2、MMP-7高表达尤为显著.③与蜕膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在EVCT中表达显著降低(P＜0.05).MMP-2、MMP-9、MMP-13在EVCT中升高有显著性(P＜0.05).且在滋养层细胞中,MMP-2、-9高表达尤为显著.④MMPs之间的相关性:MMP-2与MMP-9相关关系显著(P＜0.05),且关系较密切(r=0.6645).MMP-1,MMP-3,MMP-7两两间相关关系显著(P＜0.05),且关系密切(r＞0.7340).其他MMP之间相关关系不显著.结论 首次利用Luminex xMAP方法多通量的检测到子宫内膜间质细胞、早孕蜕膜细胞与滋养层细胞的多种MMPs的表达,它们均可分泌多种MMP,但是不同种类组织细胞的表达量不同;MMPs可能通过调控子宫内膜蜕膜化及母胎界面间MMPs的变化而影响胚胎着床,为成功妊娠创造条件.
关键词： 绒毛外细胞滋养层细胞 蜕膜细胞 子宫内膜 基质金属蛋白酶 液相蛋白芯片 -
人绒毛外细胞滋养层细胞与蜕膜基质细胞共培养模型的建立
目的模拟体内环境,建立可保持绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)与蜕膜基质细胞(DSC)生物学特性的共培养细胞模型,应用于研究滋养细胞的侵袭行为.方法利用胰酶消化和BSA、Percoll梯度沉降,收集纯化人早孕绒毛组织的EVCT和DSC,分别放入Transwell的上下小室,观察该模型下细胞形态变化及侵袭特性,免疫组化、免疫荧光染色检测细胞的纯度.结果免疫组化显示EVCT的细胞角蛋白7阳性表达的细胞数占95%以上,阳性表达转化生长因子β2的细胞数占95%以上,DSC泌乳素阳性表达的细胞数也超过95%,证实共培养系统中EVCT和DSC纯度均在95%以上,且生物学特性得以维持.上室中的EVCT保持了其侵袭能力,在Matrigel包被的滤膜上EVCT的侵袭指数为3.22±0.04.结论适当的培养方法可获得高纯度的EVCT和DSC,并使其维持特有的生物学活性,成功地建立了共培养系统模型,便于研究滋养细胞侵袭和胚胎着床的机制.
关键词： 绒毛外细胞滋养层细胞 蜕膜基质细胞 共培养 侵袭 Transwell
