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PCAN1基因文献资料
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人PCAN1基因启动子的克隆及其上游调控区域的鉴定
目的 克隆人前列腺癌基因1(PCAN1)5′上游2.6kb启动子片段,构建pGL3-p2.6kb载体, 测定其启动子活性,初步鉴定该片段内的DNA调控区域.方法 采用PCR法从人基因组DNA中扩增PCAN1基因5′上游2.6kb启动子片段,并构建到荧光素酶报道基因载体pGL3-basic中,构成pGL3-p2.6kb;瞬时转染前列腺癌细胞LNCaP,通过双荧光素酶活性检验测定PCAN1启动子活性. 使用Erase-a-system对pGL3-p2.6kb载体中2.6kb片段进行一系列5′侧翼缺失,产生12个缺失体,分别瞬时转染LNCaP细胞,通过检测荧光素酶的活性观察缺失突变对PCAN1启动子活性的影响.结果 克隆的PCAN1 2.6kb启动子片段经测序鉴定正确无误; pGL3-p2.6kb转染LNCaP细胞后,双荧光素酶活性测定结果显示2.6kb片段具有明显的启动子活性;5′缺失突变分析显示,PCAN1基因上游-1599bp至-1541bp、-347bp至-84bp的缺失,与2.6kb片段相比,启动子活性分别升高2.24倍和2.53倍,-1541bp至-1226bp的缺失,与2.6kb片段相比,启动子活性降低2.11倍.结论 克隆的人PCAN1基因5′上游2.6kb片段具有较强的启动子活性,PCAN1基因上游2.6kb区域内分别存在2个负调控区和1个正调控区.
