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肺腺癌细胞系A549肿瘤始发细胞的测定
目的 通过克隆形成及致瘤能力研究肺腺癌细胞系A549肿瘤始发细胞的比例.方法 采用有限稀释法,检测细胞单克隆形成的数量及大小;收集来自于1个细胞形成的克隆细胞,种于BALB/C裸鼠皮下,观察其致瘤能力;采用CD133磁珠分选A549细胞,测定CD133+、CD133-细胞的克隆形成能力,测定Hoechst33342染色对非SP细胞的增殖能力和单克隆形成能力的影响.结果 45%以上的A549细胞能够形成大于100个细胞的大克隆,其传代后又能形成新的克隆,来源于1个大克隆的细胞种植到BALB/C裸鼠身上,10 d左右能形成肉眼可见的肿瘤;CD133+、CD133-细胞克隆形成能力相同;Hcechst33342染色能够明显干预细胞的克隆形成及增殖能力.结论 45%以上的A549细胞是肿瘤始发细胞.
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切割bcl-2核酶对人胆管癌细胞致瘤性的影响
目的研究切割bcl-2 mRNA核酶对人胆管癌细胞致瘤性的影响。方法将合成的切割bcl-2 mRNA核酶(ribozyme,RZ) 基因定向插入到真核细胞表达载体pDOR-neo内，并用重组后的载体转染人胆管癌细胞QBC939，再将经转染核酶基因的胆管癌细胞5×106个分别接种于20只裸鼠皮下，观察该肿瘤细胞的致瘤情况。结果转染切割bcl-2 mRNA核酶基因的胆管癌细胞的bcl-2表达水平及裸鼠体内致瘤性（0/5）较对照组（8/10和5/5）明显下降。结论该切割bcl-2 mRNA核酶能明显降低人胆管癌细胞内bcl-2的表达水平及其在裸鼠体内的致瘤性。
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成人骨髓源性神经干细胞的致瘤性研究
目的研究体外培养的成人骨髓源性神经干细胞的致瘤性.方法对骨髓源性神经干细胞分别进行细胞形态学观察、刀豆球蛋白A凝集试验和双层软琼脂培养以探明其是否具有恶性转化细胞的形态特征、表面结构及生长特性的变化;利用免疫细胞化学的方法检测骨髓源性神经干细胞的端粒酶和肿瘤相关基因的表达;将骨髓源性神经干细胞接种到裸鼠体内观察其成瘤性.结果骨髓源性神经干细胞不具有恶性转化细胞的形态特征,在不同刀豆球蛋白A浓度下均未见明显的凝集反应,在双层软琼脂不能形成细胞克隆;骨髓源性神经干细胞的c-myc、c-fos和p53基因均呈阴性表达,而端粒酶逆转录酶呈弱阳性表达;将骨髓源性神经干细胞接种于裸鼠皮下6个月未见肿瘤形成,亦未见其它组织形成.结论骨髓源性神经干细胞保持了正常细胞的生物学特征,体内和体外的各项指标均未提示其具有致瘤性,体外的培养条件没有使其发生恶性转化,从致瘤性方面证实了骨髓源性神经干细胞临床移植的安全性.
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冻存后脐血DC介导的食管癌疫苗体内致瘤性研究
目的:探讨低温冻存后脐血树突状细胞(DC)与EC109食管癌细胞融合疫苗体内致瘤性.方法:免疫磁珠标记法分选人脐血CD34+干细胞,细胞因子扩增培养为成熟DC,聚二乙醇(PEG)融合法制备EC109-DC融合疫苗,流式细胞术双阳性标记鉴定融合疫苗,-80℃低温冰箱冻存,3周后融冻,流式细胞术再次鉴定融合疫苗,行体内致瘤性研究.结果:(1)融冻后疫苗体外半悬浮生长;同时高表达FR和CD80;(2)融冻后疫苗接种于SCID小鼠体内未见肿瘤形成,脾、肺和肝等器官未出现肿瘤病变.结论:冻存未破坏融合疫苗的完整性,融冻瘤苗无体内致瘤性,其亲本EC109细胞的恶性生长特征已丧失,安全可靠.
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脐带间充质干细胞临床前安全性考察
目的：通过临床前动物实验评价,初步了解人源脐带间充质干细胞( human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUMSCs)的生物安全性。方法选取小鼠、大鼠和裸鼠做为评价模型,使用不同剂量的 hUMSCs进行评价,考察hUMSCs进入动物体内后的急性毒性反应、长期毒性反应以及致瘤性情况。结果急性毒性试验：在注射剂量不超过1.25×108个/kg时,血气学分析和剖解检测小鼠未呈现出毒性反应,hUMSCs的LD50和MTD分别为1.632×108个/kg、1.25×108个/kg。长期毒性试验：选取1.00×107个/kg、5.00×106个/kg和2.50×106个/kg三个剂量,进行12次静脉注射,观察6个月。受试大鼠注射后与对照组相比,在行为学、血气分析、血液指标检测和脏器系数比等方均未有异常变化。致瘤性试验：未有异常成瘤现象。结论本试验中,hUMSCs在受试动物体内未呈现出异常反应。
