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灯盏乙素对阿尔茨海默病小鼠脑组织β分泌酶途径相关蛋白表达的影响
目的 观察灯盏乙素(Scu)对阿尔茨海默病(AD)小鼠脑组织中β淀粉样肽(Aβ)生成途径中β分泌酶途径相关蛋白的影响.方法 取类AD动物模型APPswe/PS1dE9双转基因小鼠40只,分为Scu低、中、高剂量组和模型组各10只,另取C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组.Scu低、中、高剂量组分别给予Scu 1.5、2.5、4.0 mg/(100 g·d)灌胃,正常对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃,连续90 d.治疗后采用Morris水迷宫检测学习记忆能力,第1～4天进行定向航行试验,记录逃避潜伏期,第5天进行空间探索实验,记录第1次穿越原站台时间及1 min内穿过原站台位置的次数.小鼠断颈处死,采集脑组织标本,Western blotting法检测 β淀粉样前体蛋白(APP)、β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、BACE2蛋白表达,Real-time PCR法检测APP、BACE1、BACE2 mRNA表达.结果 与正常对照组相比,模型组在定向航行中逃避潜伏期时间延长,第1次穿越平台时间明显延长,平台穿越次数减少(P均<0.01);与模型组比较,高剂量Scu组逃避潜伏期时间缩短,第1次穿越平台时间缩短,平台穿越次数增多(P均<0.01).中、低剂量组与模型组比较无统计学差异(P均>0.05).与正常对照组相比,模型组脑组织中APP和BACE1蛋白及mRNA表达升高,BACE2蛋白表达水平下降;Scu高剂量组脑组织中APP和BACE1蛋白及mRNA表达降低,BACE2蛋白表达水平升高(P均<0.05).各组脑组织中BACE2 mRNA表达无统计学差异(P均>0.05).结论 Scu能够调节AD小鼠Aβ生成途径中主要因子APP、BACE1蛋白和mRNA以及BACE2蛋白表达,通过干预APP代谢的β分泌酶途径来抑制Aβ生成.
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真核表达载体pcDNA3.1-β淀粉样前体蛋白裂解酶的构建及其在COS-7细胞中瞬时表达
目的构建β淀粉样前体蛋白裂解酶(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme, BACE)基因的真核表达载体,为修复阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)损伤神经元奠定基础.方法采用RT-PCR 方法,从人的成神经细胞瘤的总cDNA中,扩增出1.5 kb 的BACE cDNA片段,再用BamHI和XhoI双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;以免疫细胞化学法检测BACE基因的表达情况.结果人BACE基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1质粒中;经脂质体转染COS-7细胞后,并由潮霉素进行筛选,可见转染细胞胞浆中和胞膜上有较高量的BACE蛋白表达.结论成功构建了pcDNA3.1-BACE的真核表达载体,为研究BACE基因在AD发病机制中的作用及抑制BACE,为治疗AD奠定一定的实验基础.
关键词： 基因克隆 阿尔茨海默病 β淀粉样前体蛋白裂解酶
