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血红素合成酶特异性RNAi表达载体的构建及其干扰效果鉴定
目的 利用含红色荧光报告基因(DsRed)的pGCsi-U6/Neo/DsRed/质粒构建干扰人红系特异的γ-氨基-6-酮戊酸合成酶(eALAS)基因表达的短发夹RNA(shRNA)表达载体,并进行活性鉴定.方法 根据GenBank中eALAS的序列,设计3条表达shRNA的互补DNA序列,分别克隆至质粒载体pGCsi-U6/Neo/DsRed中构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株扩增后,提取质粒测序分析,以相同的方法构建并鉴定eALAS基因的真核表达载体pEGFP-N1-eALAS;将3种pGCsi-U6/Neo/DsRed/eALAS-shRNA分别与pEGFP-N1-eALAS共转染HEK293细胞株,通过流式细胞仪检测pEGFF-N1-eALAS融合蛋白的荧光强度,选择佳RNA干扰(RNAi)靶点,并在基因和蛋白水平检测eALAS的表达,进一步验证佳RNAi靶点的敲减效率.结果 经测序,模板序列与设计序列完全正确,佳RNAi靶点敲减效率达72.45%,eALAS在基因和蛋白水平显著下降.结论 成功构建了eALAS特异性RNAi表达载体,为下一步研究铁效应元件eALAS在铁代谢异常所致红系统疾病的机制奠定了基础.
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遗传性高铁蛋白血症-白内障综合征
遗传性高铁蛋白血症-白内障综合征是一种少见的遗传性铁代谢疾病,属常染色体显性遗传,是由于铁蛋白轻链基因5'-非翻译区的铁效应元件的突变所致.临床特点为血清铁蛋白水平显著增高和双侧先天性白内障,但无铁负荷增加的实验室指标,以及无炎症和或肿瘤存在的证据.本文对遗传性高铁蛋白血症-白内障综合征的分子遗传发病机制、与铁稳态调控的关系及其临床特点作一综述.
关键词： 遗传性高铁蛋白血症-白内障综合征 铁蛋白 铁效应元件 铁调节蛋白 转铁蛋白受体 -
铁与衰老:铁调节机理
调节铁吸收、运输、储藏和利用的细胞机理和分子机理已有重大进展.但衰老对它们的影响,以及铁在衰老过程中的作用还不完全了解.有研究提出一个观点:铁-线粒体相关调节机理可能是衰老过程中起作用的一个因素.
