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白藜芦醇对抑郁模型小鼠认知功能及小清蛋白的影响
目的 探讨白藜芦醇拮抗抑郁症伴发的认知功能障碍及其可能的机制.方法 32只C57BL/6J小鼠随机分为四组(n=8):对照组(Control)、模型组(Model)、白藜芦醇给药组(Model+RSV)、烟酰胺+白藜芦醇给药组(Model+ NA+ RSV).除对照组外,其余3组小鼠腹腔注射皮质酮[(20mg/(kg·d)]21 d诱导抑郁动物模型,从第22天开始分别给予生理盐水、白藜芦醇[(400 mg/(kg·d)]或烟酰胺[(100 mg/(kg·d)]及白藜芦醇[(400 mg/(kg·d)]21 d,通过糖水偏爱实验、新物体识别实验、新位置识别实验及水迷宫实验评价白藜芦醇对抑郁症伴发的认知功能障碍的影响,Western blot检测小鼠海马组织沉默信息调节因子1(silence information regulation factor 1,SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α(peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1 α,PGC-1α)、小清蛋白(parvalbumin,PV)表达,RT-PCR检测小鼠海马SIRT1、PGC-1α及PV的转录水平.结果 糖水偏爱实验结果表明皮质酮注射诱导抑郁模型建立成功[F(1,30)=6,P=0.038].与抑郁模型组相比,白藜芦醇显著增加了新位置识别实验中小鼠识别新位置的次数比[(-0.20±0.37);(0.16±0.29)]、时间比[(0.10±0.45);(0.62±0.29)],降低了距离比[(0.09±0.36);(0.55±0.27)];白藜芦醇降低了水迷宫实验中小鼠找到平台的时间[(41±9)s;(26±8)s]、距离[(295±70) cm,(224±43) cm],该表观有效性伴随着小鼠海马组织SIRT1[F(3,29)=15.60,P＜0.01],PGC-1α[F(3,29)=7.51,P=0.0006]及PV[F(3,29)=17.87,P=0.0004]蛋白表达的增加.而预先给予烟酰胺再给予白藜芦醇,将无法纠正抑郁症伴发的认知功能损伤及SIRT1、PGC-1α、PV表达转录及翻译水平的下调.结论 白藜芦醇能够改善抑郁模型小鼠认知功能的损伤,这可能是通过活化SIRT1/ PGC-1α信号通路进而增加PV的转录和表达而实现的.
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冠状动脉粥样硬化与AMPK、SIRT1基因表达的关系初步研究
目的:通过检测冠状动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞(PBMC)中单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)以及沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(SIRT1)的基因表达情况,初步探讨AMPK和SIRT1基因表达与冠状动脉粥样硬化形成以及调控血浆中一氧化氮(NO)水平、血脂、血糖代谢的可能机制.方法:利用普通PCR、琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR及SPSS分析软件检测冠心病者和正常对照组外周血单个核细胞(PBMC)中AMPK和SIRT1的基因表达区别,以及它们与血脂(TC、TG、LDL-c、HDL-c)、空腹血糖(FBG)、一氧化氮(NO)含量的相关性.结果:冠心病组PBMC中AMPK和SIRT1基因表达以及血浆中NO含量均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P均＜0.05).AMPK和SIRT1表达均与TC、TG、LDL-c、FBG呈负相关,与NO含量及HDL-c呈正相关(P均＜0.05).结论:冠心病患者PBMC中AMPK和SIRT1基因表达下降可能与冠心病的发病存在相关性,对调控血脂、血糖及NO生成释放中可能起到一定作用.
关键词： 单磷酸腺苷激活的蛋白激酶 沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ 冠心病 一氧化氮 -
能量限制激活Sirt1减轻心肌细胞缺血/再灌注损伤的作用
目的 研究能量限制(calorie restriction,CR)激活沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(Sirt1)在缺血/再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,I/RI)中对心肌细胞的保护作用及其机制.方法 心肌细胞系H9c2以5×105/L接种于6孔细胞培养板中,随机分为4组:对照(Con)组、缺氧复氧(hypoxia/re-oxygenation,H/R)组、H/R+低糖预处理(H/R+CR)组和H/R+低糖预处理+Sirt1抑制剂EX527(H/R+CR+EX527)组,其中Con和H/R组使用葡萄糖浓度为4.5 g/L的培养基,而H/R+CR组和H/R+CR+EX527组则使用葡萄糖浓度为1.5 g/L的培养基,每组设置3个复孔,进行缺氧5h复氧1h,用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的活性,末端标记法(TUNEL)染色法检测细胞的凋亡水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Sirt1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(P-AMPK)的表达.结果 与H/R组(0.31±0.06)相比,H/R+CR组(0.11±0.02)细胞内ROS的水平明显减少(P＜0.05);H/R+CR+EX527组(0.55±0.06)细胞内ROS的水平明显增多(P＜0.05);与H/R组(0.23±0.01)相比,H/R+CR组(0.64±0.02)细胞活性明显上升(P＜0.05);H/R+CR+EX527组(0.09±0.005)细胞活性明显下降(P＜0.05);与H/R组(0.444±0.038)相比,H/R+CR组(0.222±0.556)细胞凋亡水平明显降低(P＜0.05);H/R+CR+EX527组(0.578±0.0129)细胞凋亡水平明显提高(P＜0.05);与H/R组(2.229±0.019)相比,H/R+CR组(3.712±0.010)Sirt1的表达水平明显增加(P＜0.05);而H/R+CR+EX527组(1.603±0.134)Sirt1的表达水平明显降低(P＜0.05);与H/R相(1.262±0.064)比,H/R+CR组(1.893±0.122)P-AMPK的表达水平明显增加(P＜0.05);而H/R+CR+EX527组(0.734±0.069)P-AMPK的表达水平明显降低(P＜0.05).结论 在I/RI中,CR可能通过AMPK途径激活Sirt1,进而发挥心肌保护作用.
关键词： 能量限制 沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ 缺血/再灌注损伤
