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miR-30c-2-3p调控X-box结合蛋白-1对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响
目的 探讨miR-30c-2-3p调控X-box结合蛋白-1(X box-binding protein-1,XBP1)对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 制备新生大鼠心肌细胞,随机分为对照组、缺氧/复氧组和miR-30c-2-3p处理组.对照组心肌细胞正常培养,缺氧/复氧组和miR-30c-2-3p处理组心肌细胞进行缺氧3 h/复氧6h处理;miR-30c-2-3p处理组心肌细胞于缺氧前48 h采用miR-30c-2-3p抑制剂转染慢病毒,对照组和缺氧/复氧组感染慢病毒包装的无义寡核苷酸序列.复氧6h后,采用比色法检测3组心肌细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率,流式细胞术检测正常心肌细胞比率及凋亡水平,实时荧光定量PCR法检测miR-30c-2-3p和XBP1 mRNA表达水平,Western blot法检测XBP1蛋白表达情况,双荧光素酶基因检测验证miR-30c-2-3p和XBP1的靶向关系.结果 缺氧/复氧组和miR-30c-2-3p处理组心肌细胞LDH漏出率[(28.8±4.9)％、(22.2±3.0)％]、细胞凋亡率[(28.5±3.9)％、(19.2±2.6)％]、miR-30c-2-3p(2.87±0.57、1.57±0.21)、XBP1 mRNA(1.68±0.68、3.96±0.69)和XBP1蛋白(1.96±0.40、2.73±0.61)表达均高于对照组[(4.6±1.1)％、(6.5±1.2)％、1、1、1],正常心肌细胞比率[(63.8±4.2)％、(71.6±4.0)％]低于对照组[(91.4±2.4)％](P＜ 0.05);miR-30c-2-3p处理组心肌细胞LDH漏出率、细胞凋亡率及miR-30c-2-3p表达低于缺氧/复氧组,正常心肌细胞比率、XBP1 mRNA和XBP1蛋白表达高于缺氧/复氧组(P＜0.05);双荧光素酶基因检测结果证实,XBP1为miR-30c-2-3p的靶基因.结论 在大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,miR-30c-2-3p、XBP1及XBP1蛋白呈高表达,抑制miR-30c-2-3p可通过上调XBP1表达来减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤.
