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Chelex-100法和碱性裂解法提取细菌DNA的比较
目的:通过对两种DNA提取方法的比较,寻找一种灵敏、快速、经济实用的提取方法.方法:采用Chelex-10{3法和碱性裂解法分别提取不同浓度大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923的DNA,利用通用引物扩增16SrDNA片段检测两种方法的灵敏度.结果:碱性裂解法提取的不同浓度的两种细菌DNA,经PCR扩增均未显出目的条带;chelex-100法提取不同浓度的两种细菌DNA均扩增出目的条带,PCR检测大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的灵敏度均为1.2×101cfu/ml,电泳结果提示相同浓度的大肠杆菌被提取到的DNA含量比金黄色葡萄球菌的含量高.结论:Chelex-100法操作简便,可用于细菌DNA的快速提取.
关键词： Chelex-100 PCR 16SrDNA 碱性裂解法 -
用碱性裂解法提取人血凝块中基因组DNA
目的 建立一种新的从人血凝块中提取基因组DNA的方法.方法 血凝块于室温自然解冻,匀浆,碱消化,酚氯仿抽提,电泳检测.结果 用碱性裂解法从人血凝块中成功提取到基因组DNA,提取的DNA质量浓度平均为0.46 g/L,且吸光度比值A260/A280＞1.8,选取入Gpx-1基因作PCR获得满意的目的片段.结论 用碱性裂解法提取的基因组DNA的总量较高,提取效率高,PCR扩增效果好,可很好的应用于血凝块基因组DNA的提取.
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DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA
目的 研究脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA的方法在法医学中的应用.方法 收集79份性犯罪案件混合斑检材,分别用DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法和差异裂解法提取精子DNA,采用STR荧光标记复合扩增体系进行16个STR基因座分型,并比较检验结果.结果 应用DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法提取精子DNA,64例检材分型成功;应用差异裂解法提取精子DNA,57例检材分型成功;两种方法比较结果存在显著性差异(P=0.039),DNase-1纯化结合碱性裂解法提取精子DNA的STR分型成功率更高,成本低廉.结论 DNase-Ⅰ纯化结合碱性裂解法提取混合斑精子DNA 可提高检验成功率,操作简便,快速,易于自动化,适于法医学个体识别鉴定.
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生物检材DNA碱性裂解提取法的优化与改良
目的 通过对DNA碱性裂解提取法进行优化和改进,建立一种操作更简便、检验快速、结果更可靠的生物 检材DNA提取方法.方法 以抗凝血作为检验样本,通过改变提取试剂的浓度、pH值、保存时间及孵化样本的温度、时 间等条件,观测对检验结果峰值的影响,以确定提取试剂佳条件,DNA提取物佳保存条件.通过用改良后的碱性裂 解法及Chelex100法同时提取不同量的抗凝血样本、各类法医生物检材,用不同厂家的DNA试剂盒扩增,对碱性裂解法 的灵敏度、适应性和适用性进行评估.结果 改良后的碱性裂解法只需将生物检材用NaOH(0.25tmol/L)99℃孵化 8min,振荡后加入TrisHCl(0.05mol/L,pH =6.5)中和液,离心后直接扩增检测.DNA提取物于-20℃冰箱可长期保存. 对于毛发及精斑类检材优于Chelex100法.DNA提取物适用于现有各种DNA试剂盒扩增检测,其灵敏度与Chelex100 法相似.结论 改良后的碱性裂解法,操作简便、检验快速、结果可靠,可适合于法庭科学的检案与建库.
