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APOBEC3F剪接亚型与全长APOBEC3F、APOBEC3G对乙肝病毒作用的比较
目的 比较APOBEC3F剪接亚型3F79与完整APOBEC3F以及APOBEC3G对HepG2.2.15细胞中HBV DNA复制及HBsAg、HBeAg抗原分泌的影响.方法 用PCR合成法扩增人APOBEC3F剪接亚型3F79,构建真核表达载体pEGFPC1-3F79和原核表达质粒pET28a-3F79,将pEGFPC1-3F79与含有全长APOBEC3F和APOBEC3G的质粒Pflag-APOBEC3F、PC-APOBEC3G-HA转染入HepG2.2.15中,检测转染后细胞上清中HBV DNA以及HBsAg和HBeAg的水平.结果 构建的重组载体经酶切和PCR鉴定,表明3F79基因正确地插入.将pEGFPC1-3F79与Pflag-APOBEC3F、PC-APOBEC3G-HA转染HepG2.2.15细胞后,pEGFPC1-3F79对细胞中HBV的复制及HBsAg和HBeAg的分泌无明显的抑制作用(P>0.05),而转染含有完整APOBEC3F 和APOBEC3G质粒的HepG2.2.15细胞与对照组相比,HBsAg、HBeAg、HBV DNA含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 3F79不能像完整APOBEC3F和APOBEC3G一样抑制HepG2.2.15细胞中HBV DNA复制以及抗原的分泌.
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APOBEC3F的克隆、真核表达及其抗HBV效应的初步研究
目的 克隆、体外真核表达载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3F(APOBEC3F)基因并研究其抗病毒效应.方法 应用RT-PCR的方法从人PBMC细胞中扩增APOBEC3F基因,构建HA-APOBEC3F融合蛋白真核表达载体pXFA3F,pXFA3F和具有复制能力的1.3倍HBV载体pHBV1.3共转染HepG2细胞,Western印迹检测APOBEC3F融合蛋白在HepG2细胞中的表达,ELISA方法检测细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg水平,实时定量PCR检测HBV相关mRNA水平变化.结果 克隆了APOBEC3F基因,其经测序与GeneBank公布序列一致;构建的APOBEC3F真核表达载体pXFA3F经转染可在HepG2细胞中瞬时表达;APOBEC3F可抑制乙型肝炎表面抗原和e抗原的分泌,可使转染细胞内HBV相关mRNA水平下降.结论 成功克隆并真核表达了APOBEC3F基因,其在体外具有抗HBV生物学效应.
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人体抗病毒因子APOBEC3F的研究
随着APOBEC3G的研究,APOBEC家族的各个成员也越来越受到更多地关注,很多新的成员也陆续加入.2004年,Reuben Harris研究APOBEC3G的过程中,又发现了一个新的APOBEC蛋白-APOBEC3F.
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APOBEC家族的防御机制
固有免疫是与生俱来的,从出生到死亡一直在起着重要的防御抵抗作用.当病原体对机体侵害时,免疫系统就去积极调动各个成员,比如抗菌肽,蛋白分解级联分子,信号转导分子如干扰素,还有专门的吞噬细胞等来一起抵御病原体.而事实上即使是单细胞生物的外膜和多细胞生物的上皮细胞表面也是固有免疫的防御系统,它们一直是对抗感染的屏障[1]
