首页 > 文献资料
-
抑制HSP70-2基因表达诱导肝癌细胞G2/M期阻滞的机制研究
目的 探讨HSP70-2在肝癌组织中的表达,以及抑制HSP70-2表达对肝癌细胞生长和周期影响的详细作用机制.方法 免疫组织化学检测HSP70-2在45例肝癌组织和癌旁组织中的表达.Western blot检测HSP70-2在5种肝癌细胞株中的表达.设计合成针对HSP70-2基因的特异性shRNA,构建真核表达载体HSP70-2 shRNAl和HSP70-2 shRNA2.转染肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Western blot检测HSP70-2表达及细胞周期相关蛋白p-Cdc2(Tyr15)、Cdc25C、Cdc2和cyclinB1的表达变化.结果 免疫组织化学检测显示,45例肝癌组织中有33例(73.3%)HSP70-2蛋白表达阳性.45例癌旁组织中仅4例(8.9%)表达阳性,表达差异有显著性(P<0.05).HSP70-2蛋白在HepG2、Bel-7402、Huh-7、Hep3B、SMMC-7721肝癌细胞中的表达明显高于其在LO2细胞中的表达.HSP70-2 shRNA1和shRNA2均能有效抑制肝癌细胞HepG2和Bel-7402中HSP70-2的表达.与control shRNA组相比,转染HSP70-2 shRNA1和shRNA2组HepG2和Bel-7402细胞生长增殖速度均明显减慢,细胞周期表现为处于G2/M期的细胞比例显著增加.Western blot检测发现,转染HSP70-2 shRNA1和shRNA2后肝癌细胞中磷酸化的p-Cdc2(Tyr15)表达增加,Cdc25C、Cdc2和cyclinB1表达显著减少.结论 HSP70-2在肝癌中过表达,抑制HSP70-2表达可以显著抑制肝癌细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞.其诱导G2/M期阻滞的机制是通过影响Cdc25C-Cdc2/cyclinB1通路来实现的.
