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STEAP4基因蛋白铁氧化还原酶活性分析
目的 分析肥胖相关基因STEAP4的铁氧化还原酶活性.方法 体外温箱培养昆虫细胞株(Sf9),分别将 pAcSec1-STEAP4 转移载体和pAcSec1-vector转移载体与 SapphireTM杆状病毒基因组混合后共转染 Sf9 昆虫细胞,通过G418药物筛选稳定表达STEAP4蛋白的细胞株,并抽提细胞总蛋白进一步应用Western blot 技术验证其转染情况.应用分光光度计法检测铁氧化还原酶活性.应用SPSS 11.5软件进行统计学分析.结果 Western blot 技术证实STEAP4过表达细胞株构建成功;分光光度计法检测STEAP4铁氧化还原酶活性,STEAP4过表达组A值为5.182 5±0.230 4,空载组A值为1.615 0±0.822 6,STEAP4过表达组铁氧化还原酶活性明显高于空载组,差异有统计学意义(Pa<0.001).结论 STEAP4基因蛋白具有铁氧化还原酶活性.
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STEAP4基因在人前体脂肪细胞诱导分化过程中的表达
目的 观察人肥胖相关全长新基因STEAP4在人前体脂肪细胞诱导分化过程中不同时段表达水平的变化,探讨STEAP4基因与脂肪细胞分化、脂质积聚的关系.方法 体外培养人前体脂肪细胞,待细胞生长融合后以1-甲基-3-异丁基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素及罗格列酮联合诱导方案,在体外诱导其分化为成熟脂肪细胞.在前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化过程中观察细胞形态及脂质积聚变化;采用实时荧光定量RT-PCR技术检测诱导分化不同时段(前体,第0、4、6、8、11、14、17人)脂肪细胞中STEAP4基因mRNA的表达水平.结果 STEAP4基因高表达于人前体脂肪细胞;加入脂肪细胞分化诱导剂后(第4天)表达略有上调,其后随脂肪细胞分化成熟该基因表达量呈逐渐下降趋势;至脂肪细胞完全分化成熟(第14-17天)表达鼋低.STEAP4基因表达水平除在诱导分化前至第4天、第14-17天差异无统计学意义外,余各时间点的表达水平差异均有统计学意义(Pa<0.05).结论 STEAP4基因随脂肪细胞分化成熟表达逐渐下调,可促进脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚,与肥胖的发生有关.
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TNFα对人脂肪细胞STEAP4基因表达的调控
目的 人STEAP4基因是一个参与胰岛素敏感性调节的肥胖相关差异表达基因,本研究旨在探讨胰岛素抵抗相关脂源性细胞因子TNFα对人成熟脂肪细胞中STEAP4基因的调节作用.方法 体外培养人前体脂肪细胞,在诱导人前体脂肪细胞分化成熟的基础上,应用不同浓度(0、5、10、25、50 ng/mL)人重组TNFα干预成熟脂肪细胞24 h,采用实时荧光定量RT-PCR技术、Western blot技术检测干预后人成熟脂肪细胞STEAP4基因在核酸和蛋白表达水平的变化.结果 不同浓度TNFα(5、10、25、50 ng/mL)干预24 h能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4基因的mRNA表达,与未干预对照组差异有显著性(P<0.05);50 ng/mL TNFα干预时STEAP4基因在人成熟脂肪细胞中的mRNA表达水平高.与基因表达结果相一致,不同浓度TNFα(5、10、25、50 ng/mL)干预24 h能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4蛋白的表达,与未干预对照组差异有显著性(P<0.05);干预浓度提高到25 ng/mL时干预效果为明显.结论 TNFα能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4基因核酸和蛋白的表达.
