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  • 大黄酸对人前体脂肪细胞增殖与分化的影响

    作者:袁小青;马向华;丁亚琴;王芳;沈捷

    目的:研究大黄酸(rhein,Rh)对人前体脂肪细胞增殖与分化的影响,并进一步探讨其作用机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法测定RH对人前体脂肪细胞增殖的影响;通过形态学观察脂肪细胞的分化程度及形态学变化;并用油红O染色法,检测脂肪细胞内甘油三酯积聚量的变化;应用RT-PCR检测RH干预后分化抑制基因CHOP mRNA的表达.结果:各浓度组RH(0.1、1、2.5、5、10 ug/ml)抑制人前体脂肪细胞增殖,作用呈剂量依赖性;RH对脂肪细胞分化的抑制作用亦呈剂量依赖性;1 ug/ml的RH使CHOP mRNA表达增加.结论:RH可抑制人前体脂肪细胞增殖与分化,该作用可能与CHOP表达上调有关.

  • Leptin对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达的调控

    作者:朱金改;赵亚萍;张春梅;陈小慧;高春林;朱春;郭锡熔

    目的:观察leptin对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达的调节作用.方法:体外培养人前体脂肪细胞,在诱导人前体脂肪细胞分化成熟的基础上,应用100 ng/ml人重组leptin分别干预成熟脂肪细胞6、24 h,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测成熟脂肪细胞中NYGGF4基因mRNA的表达水平.结果:100 ng/ml leptin干预人成熟脂肪细胞6 h后,NYGGF4基因mRNA的相对表达量为0.000 476±0.000 178,显著低于对照组0.001 14±0.000 275.P<0.05;干预24 h NYGGF4基因mRNA的相对表达量为0.000 835±0.000 211,也显著低于对照组0.001 419±0.000 193,P<0.05.结论:leptin能显著下调成熟脂肪细胞中NYGGF4基因的表达.

  • 吡格列酮对人脂肪细胞中脂联素及其受体mRNA表达的影响

    作者:丁亚琴;马向华;沈捷;周建英

    目的:探讨噻唑烷二酮类药物吡格列酮对人脂肪细胞中脂联素及其受体mRNA表达的影响.方法:取外科手术患者腹网膜脂肪组织,进行人前体脂肪细胞的原代培养并诱导其分化.适时用不同浓度的吡格列酮进行药物干预,取分化第10d的脂肪细胞用于实验,分设对照组和药物干预组,提取RNA后以RT-PCR方法检测脂联素及其受体的mRNA的表达,比较其差异.结果:吡格列酮药物干预组人脂肪细胞中脂联素及其受体的mRNA的表达量高于不加药物的对照组.结论:噻唑烷二酮类药物吡格列酮能增加人脂肪细胞中脂联素及其受体的mRNA的表达.

  • miR-1268重组慢病毒质粒构建及其在人前体脂肪细胞中的表达验证

    作者:周雨森;徐广峰;赵亚萍;汪春晖

    目的 构建miR-1268重组慢病毒质粒,观察其在人前体脂肪细胞HPA中的表达情况.方法 从NCBI GenBank数据库查找miR-1268的DNA序列,用Primer 5.0软件设计PCR引物,以HPA细胞的DNA为模板进行PCR扩增;克隆慢病毒表达载体,进而包装成空载慢病毒和miR-1268过表达慢病毒;HPA细胞分别感染空载慢病毒和miR-1268过表达慢病毒,荧光定量PCR检测miR-1268表达水平.结果 测序结果表明,miR-1268前体序列与GenBank上的序列完全相同.与空载慢病毒感染的HPA细胞比较,miR-1268过表达慢病毒感染的HPA细胞miR-1268上调2.5倍.结论 成功构建miR-1268重组慢病毒质粒,感染的HPA细胞高表达miR-1268.

  • STEAP4抗体干预对人前体脂肪细胞内活性氧、线粒体膜电位的影响

    作者:秦大妮;季晨博;朱春;寇春兆;朱金改;郭锡熔

    目的 探讨STEAP4抗体干预对人前体脂肪细胞内活性氧(ROS)线粒体膜电位的影响.方法 应用锥虫蓝活性试验对细胞活性进行检测,并进一步确定STEAP4抗体原液按1:250的比例稀释.体外培养人前体脂肪细胞,应用质量浓度为0.5g·L-1的STEAP4抗体.按1:250的比例稀释后(即质破浓度为0.125 g·L-1)干预人前体脂肪细胞.应用激光共聚焦显微镜拍照,定性、定量分析ROS、线粒体膜电位变化.结果 STEAP4抗体按1:250比例稀释作用了于人前体脂肪细胞后,可显著降低细胞活性;人前体脂肪细胞在STEAP4抗体按1:250稀释浓度干预下,细胞内ROS水平显著增加、线粒体膜电位水平显著降低,差异均有统计学意义(Pa<0.05).结论 STEAP4抗体按1:250比例稀释后,作用于人前体脂肪细胞后可显著提高ROS水平、降低其线粒体膜电位,推测STEAP4基因影响胰岛素敏感性的机制可能涉及线粒体功能变化.

  • STEAP4基因在人前体脂肪细胞诱导分化过程中的表达

    作者:陈小慧;赵亚萍;高春林;张春梅;朱春;朱金改;郭锡熔

    目的 观察人肥胖相关全长新基因STEAP4在人前体脂肪细胞诱导分化过程中不同时段表达水平的变化,探讨STEAP4基因与脂肪细胞分化、脂质积聚的关系.方法 体外培养人前体脂肪细胞,待细胞生长融合后以1-甲基-3-异丁基黄嘌呤、地塞米松、胰岛素及罗格列酮联合诱导方案,在体外诱导其分化为成熟脂肪细胞.在前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化过程中观察细胞形态及脂质积聚变化;采用实时荧光定量RT-PCR技术检测诱导分化不同时段(前体,第0、4、6、8、11、14、17人)脂肪细胞中STEAP4基因mRNA的表达水平.结果 STEAP4基因高表达于人前体脂肪细胞;加入脂肪细胞分化诱导剂后(第4天)表达略有上调,其后随脂肪细胞分化成熟该基因表达量呈逐渐下降趋势;至脂肪细胞完全分化成熟(第14-17天)表达鼋低.STEAP4基因表达水平除在诱导分化前至第4天、第14-17天差异无统计学意义外,余各时间点的表达水平差异均有统计学意义(Pa<0.05).结论 STEAP4基因随脂肪细胞分化成熟表达逐渐下调,可促进脂肪细胞的分化成熟和脂质积聚,与肥胖的发生有关.

  • TNFα对人脂肪细胞STEAP4基因表达的调控

    作者:陈小慧;赵亚萍;朱春;季晨博;张春梅;朱金改;高春林;郭锡熔

    目的 人STEAP4基因是一个参与胰岛素敏感性调节的肥胖相关差异表达基因,本研究旨在探讨胰岛素抵抗相关脂源性细胞因子TNFα对人成熟脂肪细胞中STEAP4基因的调节作用.方法 体外培养人前体脂肪细胞,在诱导人前体脂肪细胞分化成熟的基础上,应用不同浓度(0、5、10、25、50 ng/mL)人重组TNFα干预成熟脂肪细胞24 h,采用实时荧光定量RT-PCR技术、Western blot技术检测干预后人成熟脂肪细胞STEAP4基因在核酸和蛋白表达水平的变化.结果 不同浓度TNFα(5、10、25、50 ng/mL)干预24 h能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4基因的mRNA表达,与未干预对照组差异有显著性(P<0.05);50 ng/mL TNFα干预时STEAP4基因在人成熟脂肪细胞中的mRNA表达水平高.与基因表达结果相一致,不同浓度TNFα(5、10、25、50 ng/mL)干预24 h能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4蛋白的表达,与未干预对照组差异有显著性(P<0.05);干预浓度提高到25 ng/mL时干预效果为明显.结论 TNFα能显著上调人成熟脂肪细胞中STEAP4基因核酸和蛋白的表达.

  • NYGGF4基因在人前体脂肪细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子α对其调控的研究

    作者:赵亚萍;王加林;蔡友群;陈小慧;张春梅;郭锡熔

    目的 观察人前体脂肪细胞诱导分化过程中NYGGF4基因mRNA表达水平的变化,探讨重组肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα)对成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达水平的调节作用.方法 体外培养人内脏来源的原代前体脂肪细胞(human preadipocytes-visceral,HPA-v),在诱导HPA-v分化成熟的基础上,应用不同浓度重组TNFα干预成熟脂肪细胞16 h,或以10 ng/mL TNFα分别干预不同时间,采用实时荧光定量逆转录PCR技术检测的NYGGF4 mRNA表达水平.结果 (1)HPA-v诱导分化至第17 d,具备成熟脂肪细胞特征;(2)NYGGF4基因低表达于人前体脂肪细胞中,随脂肪细胞分化成熟其表达水平逐渐升高;(3)随TNFα干预浓度增高及干预时间延长,人成熟脂肪细胞中NYGGF4mRNA水平呈现逐渐升高的趋势.结论 NYGGF4基因具随脂肪细胞分化成熟表达逐渐上调的特征,TNFα能显著上调成熟脂肪细胞中NYGGF4基因的表达,其效应具有剂量依赖和时间反应性.

  • 人类肥胖相关新基因LYRMl在人前体脂肪细胞分化过程中的表达变化

    作者:邱洁;郭锡熔;周晓玉;程锐;曹兴国;王玢;张敏

    [目的] 观察LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化过程中表达水平的变化. [方法] 体外培养人前体脂肪细胞,采用RT-PCR及Western-Blot技术检测LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化不同阶段(前体脂肪细胞;0、2、6、12 d)核酸及蛋白水平的表达变化. [结果] LYRM1基因在分化第2 d(Day2)时核酸及蛋白表达水平均明显上调,与各时段的表达水平差异有显著性(P<0.01),其余各组之间差异无显著性(P>0.05). [结论] 初步揭示了LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化过程中的表达变化趋势.

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