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牛脉络膜微血管内皮细胞纯化和体外培养的改良方法
目的 建立快速、简便地培养脉络膜微血管内皮细胞的方法,为脉络膜新生血管疾病的研究提供细胞模型.方法 显微分离牛脉络膜微血管,采用1 g·L-1胶原酶一步法消化,并采用免疫磁珠分选脉络膜微血管内皮细胞,使用内皮细胞培养基进行原代培养.利用光学和电子显微镜进行形态学观察,利用Von Willebrand因子免疫荧光染色及Dil-Ac-LDL吞噬实验进行细胞学鉴定,利用管腔形成实验观察内皮细胞形成管腔能力.结果 采用本研究改良的方法可以获得纯度高达95%的脉络膜微血管内皮细胞,外观呈细长形,融合后呈典型铺路石样外观.电子显微镜观察可见胞浆内靠近核膜外的Weibel-Palade小体(棒状小体);免疫荧光显示Von Willebrand因子表达阳性,Dil-Ac-LDL吞噬实验阳性;在凝胶中可以形成明显管腔结构.结论 本研究改良的方法成功地分离并纯化了牛脉络膜微血管内皮细胞,可在短期内快速简便地获得足够数量的内皮细胞.
关键词： 脉络膜微血管内皮细胞 牛 细胞培养 -
脉络膜微血管内皮细胞的培养及相关研究
脉络膜新生血管与眼部多种疾病有关,而脉络膜微血管内皮细胞是研究脉络膜新生血管的重要工具.目前已有数种脉络膜微血管内皮细胞体外培养体系,为脉络膜新生血管发病机制的研究和防治提供了可靠的体外模型.
关键词： 细胞培养 脉络膜微血管内皮细胞 脉络膜新生血管 -
糖基化终产物对脉络膜微血管内皮细胞增生和管腔形成的影响
目的:研究糖基化终产物(advanced glycationendproducts,AGEs)在年龄相关性黄斑变性发生中的作用.方法:使用lycopersicon esculentum agglutinin包被磁珠的改良方法分离牛脉络膜微血管内皮细胞(bovine choroidal endothelial cells,CEC),采用抗Ⅷ因子免疫细胞化学法和摄取低密度脂蛋白(dil-acetylated low-density lipoprotein,dil-ac-LDL)法进行细胞鉴定.将50g/L牛血清白蛋白和150g/L葡萄糖在37℃孵育6wk以制备AGEs,通过抗-AGEs抗体点杂交法定性分析.用MTT法(3,(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide assay)测定CEC增生,用Vitrogen凝胶系统观察管腔形成情况.结果:培养细胞中90%以上呈因子阳性,并具有摄取dil-ac-LDL的能力,表明具有内皮细胞的特征.制备的AGEs与抗-AGEs抗体具有亲和力.浓度在62.5～500mg/L范围内的AGEs处理CEC 3d后,细胞增生呈剂量依赖性增加.碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)可明显增强CEC中管腔样结构的形成(P＜0.05),但500mg/L和50mg/L的AGEs对CEC管腔形成无明显影响(P＞0.05).结论:AGEs可以促进CEC的增生,但对其管腔形成无影响.提示AGEs通过增强CEC增生,可能是渗出型AMD发病中潜在的启动因子之一.
