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糖尿病小鼠视网膜中JNK3 mRNA表达的动态变化
背景 糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病常见的眼部并发症,其发病机制与多种因素有关,c-jun N末端激酶(JNK)作为一种凋亡基因,在糖尿病的病理过程中发挥着重要作用,其研究已成为近些年的热点之一,而JNK3作为JNK的亚基因之一,在DR中的研究目前较少.目的 定量检测JNK3在糖尿病小鼠视网膜中的表达,探讨JNK3在DR中的作用.方法 选取SPF级6～8周龄C57BL/6雄性小鼠48只,适应性喂养1周后按照随机数字表法分为糖尿病组和正常对照组.30只糖尿病组小鼠用一次性腹腔内注射柠檬酸钠缓冲液溶解的质量分数1％链脲佐菌素(STZ)的方法诱导糖尿病模型,18只对照组小鼠腹腔内注射等容量柠檬酸钠缓冲液.分别于造模后2、4、8周摘除小鼠左眼眼球,提取视网膜组织,采用实时定量PCR法检测JNK3 mRNA在小鼠视网膜中表达的动态变化.结果 造模后2、4、8周,糖尿病组小鼠血糖水平明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(t=-5.675、-5.498、-5.347,P＜0.01).糖尿病组和正常对照组在造模后不同时间点小鼠视网膜中JNK3 mRNA相对表达量(A值)的差异均有统计学意义(F分组=102.345,P＜0.05;F时间 =131.679,P＜0.05);其中造模后4周和8周糖尿病组小鼠视网膜中JNK3 mRNA相对表达量分别为3.21±0.14和5.43±0.37,均明显高于正常对照组的2.54 ±0.42和2.26±0.67,差异均有统计学意义(t=4.073、23.399,P＜0.05);糖尿病组内比较可见,造模后8周小鼠视网膜中JNK3 mRNA相对表达量明显高于2周和4周值,差异均有统计学意义(t=10.756、16.857,P＜0.05).结论 JNK3在糖尿病小鼠视网膜中表达量上调,其早期表达量随时间延长而增加.JNK3可能参与早期DR的发生和发展.
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C57BL/6小鼠心肺复苏后心肌细胞线粒体自噬及细胞凋亡的相互作用与调节机制的研究
目的:探讨在心搏骤停心肺复苏系统性缺血再灌注损伤过程中,C57BL/6小鼠心室肌细胞线粒体自噬与细胞凋亡之间的相互作用和调控机制.方法:80只健康雄性C57BL/6小鼠应用高钾合并窒息法制备心搏骤停心肺复苏模型.其中6只复苏前组,74只小鼠造模.造模小鼠中有50只自主循环恢复(ROSC),将其随机分为复苏后2、12、24、48 h组.应用透射电镜检测心肌细胞线粒体形态;应用Western blot检测线粒体自噬蛋白表达和蛋白磷酸化表达,检测与线粒体相关的细胞凋亡信号通路的蛋白表达和蛋白磷酸化表达.结果:C57BL/6高钾心搏骤停心肺复苏小鼠模型在复苏后48 h内线粒体自噬特异性信号蛋白LC3-Ⅱ表达持续显著增加,启动线粒体自噬的蛋白ULK1表达也持续增加.在复苏后12、24、48 h C57 BL/6小鼠通过mTOR磷酸化ULK1抑制线粒体自噬过度增加.C57BL/6小鼠在复苏后2、12 h凋亡信号caspase-9蛋白活化增加,复苏后24、48 h caspase-9蛋白激活逐步减少.心肺复苏后抑制凋亡因子Bcl-2未被明显激活.蛋白细胞色素C(Cyt c)和Smac/Diablo是线粒体释放的促进细胞凋亡的信号.C57 BL/6小鼠在复苏后48 h内线粒体释放的Smac/Diablo未见显著增加,线粒体释放的Cyt c在复苏后12 h达到峰值.结论:免疫功能正常的C57BL/6小鼠心肌细胞在心搏骤停心肺复苏系统性缺血再灌注损伤过程中,激活线粒体自噬,清除受损的线粒体.在复苏后24 h抑制线粒体自噬的信号通路也被激活,提示体内的调控机制发挥作用,防止线粒体过度自噬.线粒体释放促进细胞凋亡的信号蛋白Cyt c在复苏后12 h达到峰值.Cyt c与procaspase-9/Apaf 1交联,促使caspase-9活化.
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二甲基甲酰胺对C57BL/6雄性小鼠急性肝毒性效应研究
目的 探讨N,N-二甲基甲酰胺(DMF)对C57BL/6雄性小鼠肝脏的急性毒性效应.方法 32只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,每组8只.2、3、4组单次经口染毒1 500 mg/kg(bw DMF后分别在24 h,48 h,72 h处死.1组为空白对照组.记录各组小鼠染毒前后的体重并计算肝脏系数.摘眼球取血并分析血生化指标,光镜下观察肝组织切片检查肝脏损伤情况;LC-MS/MS检测小鼠血液中N-甲基氨基甲酰加合物(NMHb)含量.结果 与对照组相比,染毒后各组肝脏系数差异均有统计学意义(F=5.837,P＜0.05).24 h时血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平升高且差异有统计学意义(F=17.173,P＜0.05);肝脏出现多灶性水样变伴小的坏死灶,表现出较明显的肝脏毒性效应.48 h时毒性效应进一步加重,ALT、AST(天门冬氨酸转移酶)升至高峰(F=17.173,P＜0.05;F=17.633,P＜0.05),镜下呈弥漫性肝细胞坏死及炎细胞浸润等病理改变.染毒后72 h时毒性效应减轻,ALT、AST较48 h时有所下降,但与对照组比较差异仍有统计学意义(F=17.173,P＜0.05;F=17.633,P ＜0.05);肝脏以弥漫性水样变和点状坏死为主,病变程度有所减轻.2、3、4组小鼠血液NMHb含量分别为18.56±9.60、22.35±7.66和19.55±3.56 nmol/g globin,1组无检出.结论 DMF可以引起C57BL/6雄性小鼠急性肝毒性损伤并在48h左右达到高峰;NMHb可以在DMF染毒小鼠血液样本中检出.
关键词： N N-二甲基甲酰胺 C57 BL/6小鼠 肝毒性效应 N-甲基氨基甲酰加合物
