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八肽胆囊收缩素对小鼠神经元蛋白质磷酸化的影响
目的:从蛋白质可逆磷酸化修饰的角度,对小鼠神经元在八肽胆囊收缩素(CCK8)刺激下的信号转导通路进行初步研究.方法:将培养的小鼠神经元分为对照组(加入无磷培养基)、实验组(加入CCK8)、拮抗剂组(分别加入CCKA受体拮抗剂L-364 718和(或)CCKB受体拮抗剂L-365 260).采用双向电泳法观察CCK8和受体拮抗剂作用下蛋白质磷酸化水平的改变.结果:CCK8作用不同时间后,神经元蛋白质磷酸化状态发生明显改变,涉及的信号转导相关磷酸化蛋白质包括多种蛋白激酶、胞内信号分子、激素受体、转录因子等;动力学分析结果显示,主要的信号转导相关蛋白的磷酸化时间动力学曲线多数呈峰型;应用CCK受体拮抗剂作用后的结果表明,在皮质神经元中同时存在CCK的2种类型受体,其中B型受体介导的信号转导途径更复杂.结论:CCK A型、B型受体均可介导CCK8在神经元的信号转导,其中B型受体介导的信号途径可能包括肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径和JNK途径等.
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八肽胆囊收缩素刺激神经元所致信号转导中磷蛋白的动力学变化研究
目的 研究八肽胆囊收缩素(Octa-cholecystokinin,CCK8)刺激小鼠神经元所致信号转导中磷酸化蛋白的时间动力学特征.方法 培养乳小鼠神经元,随机分为CCK8刺激组和对照组,32P-NaH2PO4标记后分别给予CCK8(10-7mol/L)和等量无磷培养基,作用不同时间后液氮终止反应,经双向电泳、放射自显影,获得磷酸化蛋白质的电泳图谱.利用PDQuest 2D分析软件并结合Swiss-Prot蛋白质数据库对磷酸化蛋白质斑点进行分析并绘制出一些重要的磷酸化蛋白质磷酸化改变的时间动力学曲线.结果 CCK8作用不同时间后,神经元蛋白质磷酸化水平出现明显改变,通过对双向电泳图谱中100多个蛋白质斑点的定性分析,初步确定了小鼠神经元CCK8信号转导相关磷酸化蛋白包括多种蛋白激酶、磷蛋白磷酸酶、胞内信号分子、多种受体、转录因子及核蛋白等.对其中11种重要的信号分子动力学分析结果显示:曲线多数呈峰型,且蛋白质分子磷酸化达到峰值时间和高磷酸化状态持续时间各不相同,而PKAα表现为较持续的激活状态,MK07、GBOα则呈现双峰型.结论 CCK8在神经元的信号转导具有整合与复杂自适应控制的特征.
