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RNA 干扰人永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子对PI3K／AKT表达的影响
目的：研究抑制人永生化食管上皮恶变细胞（SHEEC）中核干细胞因子（NS）对PI3K／AKT信号转导通路中相关分子表达的影响。方法：将干扰试剂（ NS-RNAi）转染至SHEEC中以抑制NS的表达，以SHEEC组、阴性对照组（NC组）和MOCK组为对照，采用RT-PCR和Western blot方法检测干扰后PI3K／AKT通路中相关因子mR-NA和蛋白表达水平的变化。结果：NS-RNAi成功转染至SHEEC 中。抑制SHEEC 中NS的表达后PI3K和AKT mRNA的相对表达量为（0．460±0．207）和（0．492±0．233），与SHEEC组、NC组和MOCK组比较，差异有统计学意义（P均＜0．05）；干扰NS表达后PI3K和AKT蛋白的相对表达量为（0．353±0．361）和（0．312±0．068），与SHEEC组、NC组和MOCK组比较，差异有统计学意义（P均＜0．05）。结论：抑制SHEEC中NS表达后PI3K／AKT信号通路中相关因子的表达均明显下降，PI3K／AKT信号通路可能是NS发挥作用的一种非依赖P53作用的信号途径。
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永生化食管上皮恶变细胞中核干细胞因子、细胞周期蛋白B1和PTEN的表达
目的 观察核于细胞因子(nucleostemin,NS)、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)及抑癌基因PTEN mRNA和蛋白的表达情况.方法 正常食管上皮细胞(shantou human embryonic esophageal epithelial cell line,SHEE)和永生化食管上皮恶变细胞(shantou human embryonic esophageal carcinoma epithelial cell line,SHEEC)连续传代培养,取对数生长期SHEE和SHEEC细胞,采用RT-PCR及Western blot方法检测细胞中NS、Cyclin B1及PTEN mRNA和蛋白的表达并做相关性分析,MTT法检测抑制NS表达后的细胞增殖活性.结果 以SHEE细胞中NS、Cyclin B1和PTEN mRNA的表达量为1,SHEEC细胞中对应的相对表达量分别为(2.047±0.507)、(2.214 ±0.213)及(0.668 ±0.188),两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);SHEE及SHEEC细胞中NS、Cyclin B1及PTEN蛋白表达量分别为(1.142±0.113),(3.161 ±0.108)、(1.585 ±0.056),(2.173 ±0.058)及(1.894 ±0.341),(1.162 ±0.524),两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);NS mRNA和蛋白与Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达呈正相关(r=0.832,P＜0.01;r=0.991,P＜0.05),与PTEN mRNA和蛋白的表达呈负相关(r=-0.924,P＜0.01;r=-0.769,P＜0.05);MTT检测结果显示,NS RNA干扰(RNA interference,RNAi)组与空白对照组和阴性对照组在干扰后12 h细胞增殖能力差异无统计学意义(P＞0.05),而在干扰后24、36、48 h差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SHEEC细胞中NS、Cyclin B1 mRNA和蛋白的表达量均高于SHEE,而PTEN的表达量低于SHEE,NS可能对细胞恶变有影响.
关键词： 永生化食管上皮恶变细胞 核干细胞因子 细胞周期蛋白B1 PTEN
