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4.1R 基因敲除小鼠血液生理生化参数分析
目的：检测并分析蛋白4．1R 基因敲除小鼠（4．1R－／－）和野生型小鼠（4．1R＋／＋）血液生理生化参数。方法：摘眼球法采集两组小鼠（n ＝6）血液，用全自动血液细胞分析仪和生化分析仪检测血液生理生化参数。结果：血液生理参数中，4．1R－／－小鼠红细胞计数、血红蛋白、红细胞压积和中性粒细胞比率显著低于野生型小鼠（P ＜0．05）；血小板计数、平均血小板体积、血小板压积、白细胞计数、淋巴细胞比率显著高于野生型小鼠（P ＜0．05）。生化参数中，4．1R－／－小鼠碱性磷酸酶显著低于野生型小鼠，总胆红素、直接胆红素和间接胆红素显著高于野生型小鼠（P ＜0．05）。结论：蛋白4．1R 缺失可导致慢性溶血性贫血，4．1R－／－小鼠相关血液生理生化参数随之改变。
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利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7细胞株
目的 利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7巨噬细胞株,为研究4.1R在巨噬细胞中的功能奠定基础.方法 根据CRISPR/Cas9靶向原理设计并合成3个特异性识别4.1R基因的向导RNA(sgRNA),构建sgRNA-lentiCRISPRv2重组质粒并转入293T细胞中制备sgRNA-Cas9慢病毒,慢病毒侵染RAW264.7细胞,嘌呤霉素筛选出阳性细胞并稀释至单克隆,Western blotting印记检测单克隆细胞中蛋白4.1R的表达,测序确认单克隆细胞中突变位点.结果 Western blotting印迹检测结果表明筛选出的1株单克隆细胞中蛋白4.1R的表达完全缺失;测序结果表明该细胞株中4.1R基因发生了19bp的缺失突变;并且4.1R基因敲除后,RAW264.7细胞的增殖能力显著增加.结论 本研究利用CRISPR/Cas9系统成功的干扰了巨噬细胞系RAW264.7细胞中4.1R的表达,为研究4.1R在巨噬细胞中的功能提供了有效工具.
关键词： CRISPR/Cas9系统 4.1R 基因敲除 RAW264.7细胞
