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一株耐盐葡萄球菌的分离与鉴定
目的 从盐碱地土壤中分离耐盐耐药细菌.方法 采用倍比稀释法从土壤中分离不同性状的细菌,分别对这些细菌进行耐盐性实验,将筛选到耐150 g/L NaCl的菌株进行生化实验、药敏实验和16 sRNA序列分析.结果 16 sRNA分析表明从土壤中分离到一株耐盐表皮葡萄球菌,能分解乳糖和蔗糖,可在150 g/L NaCl中生长,该菌株对青霉素和苯唑西林耐药.结论 该耐盐葡萄球菌株的分离将为耐盐基因的克隆及转基因耐盐菌株的应用奠定基础.
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犬贾第虫核糖体16sRNA部分序列克隆及测定
目的获取犬贾第虫核糖体16sRNA基因序列.方法从犬贾第虫包囊中,快速提取DNA,并以DNA为模板,利用热启动PCR技术扩增出一611bp的预计大小的基因片段,纯化回收后,与PMD18-T载体连接转化到DH5a大肠杆菌中, 筛选到阳性克隆经PCR、EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,并用双脱氧链末端终止法测定DNA序列,登陆BLAST进行同源性比较和分析.结果获得了长度为611bp的基因序列,并发现与犬贾第虫核糖体的同源性高达99%.结论获得了犬贾第虫核糖体16sRNA的部分基因序列,为研究其在核酸进化领域中的地位和PCR法快速诊断贾第虫病提供了理想的基因材料.
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焦磷酸测序法在败血症常见病原体检测中的应用
目的 将焦磷酸测序技术应用于败血症常见病原体的检测鉴定.方法 根据细菌16S rRNA序列的特点,设计焦磷酸测序用的PCR扩增引物和测序引物,提取败血症常见病原体的基因组DNA,进行焦磷酸测序,分析获得的序列,进行比对,对病原体种类作出判断.结果 经焦磷酸测序可以获取有效长度28 bp的序列,使用该测序序列可以有效区分化脓性链球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷白杆菌、脑膜炎双球菌、沙门氏菌,但不能区分金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌.结论 应用焦磷酸测序可以较有效地对败血症常见病原体的种类实现种属水平的区分.
