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ρ2亚基文献资料
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γ-氨基丁酸受体ρ2亚基重组蛋白构建及表达
目的 构建γ-氨基丁酸受体ρ2(GABACR ρ2)基因的原核表达载体,诱导重组蛋白GABACR ρ2表达,转染SH-SY5Y细胞,实现GABACR ρ2亚基重组蛋白一过性表达.方法 构建重组质粒pET-ρ2-GFP-Tat;应用免疫印迹法检测GABACR ρ2表达;应用Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测GABACRρ2蛋白纯度;荧光显微镜下观察GABACR ρ2的转导作用及细胞定位.将SH-SY5Y细胞分为正常组和低氧低糖组,正常组分为正常对照组(高糖培养基培养且无蛋白转染)和正常转染组(高糖培养基培养且进行蛋白转染);低氧低糖组分为处理组(低氧低糖条件下培养)和处理转染组(低氧低糖条件下培养且进行蛋白转染);使用细胞计数试剂盒检测各组细胞活力.结果 重组质粒pET30-ρ2-Tat构建正确.纯化后的重组蛋白ρ2-Tat成功透过细胞膜转染SH-SY5Y细胞.正常对照组、正常转染组、处理组和处理转染组的细胞活力分别为(100.0±6.9)％、(89.3±3.6)％、(51.4±3.6)％和(66.1±8.5)％.正常对照组与正常转染组细胞活力比较差异无统计学意义(P＞0.05);处理组细胞活力显著低于正常对照组(P＜0.01),处理转染组细胞活力显著高于处理组(P＜0.01).结论 重组蛋白ρ2在Tat转导肽介导作用下透过细胞膜,成功建立了一过性表达重组蛋白ρ2的SH-SY5Y细胞株,为研究ρ2亚基的功能提供了新的研究方法.
关键词： γ-氨基丁酸C型受体 ρ2亚基 原核表达 蛋白转染
