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pIRES-p53-p14ARF文献资料
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单启动子p53/p14ARF非融合表达载体的构建及其在MG-63中的表达鉴定
目的 构建单启动子非融合表达载体pIRES-p53-p14ARF并观察其对骨肉瘤细胞增殖生长的影响及其功能初探.方法 将p53与p14ARF全长cDNA编码区依次亚克隆至pIRES载体中,并通过PCR、酶切鉴定重组质粒.用Lipofectamin 2000将野生型pIRES-p53-p14ARF真核表达载体转染MG-63细胞,48 h后采用axiovent200型倒置显微镜、荧光免疫细胞化学,观察其在细胞内的表达并初步探究其抑瘤功能.结果 成功构建出含p53与p14ARF全长基因片段的单启动子非融合表达载体pIRES-p53-p14ARF.RT-PCR,酶切鉴定质粒大小、位点均符合实验设计.荧光免疫细胞化学检测显示p53阳性细胞同时也表现为p14ARF免疫反应阳性,转染后瘤细胞可见散在凋亡现象.结论 pIRES-p53-p14ARF非融合表达载体的构建与真核细胞导入、目的基因表达成功.
关键词： 非融合表达 pIRES-p53-p14ARF 细胞凋亡 基因突变
