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IκBα突变体对激素难治性前列腺癌细胞放疗敏感性的影响
目的:探讨转染IκBα突变体(IκBαM)基因对激素难治性前列腺癌放疗敏感性的影响.方法:将IκBαM基因转染入激素难治性前列腺癌PC 3M细胞系,采用Western blot法检测癌细胞IκBαM基因表达.X射线照射后,采用MTT比色法检测癌细胞体外生长活性;采用Annexin V-FITC和碘化吡啶双染色流式细胞仪法检测癌细胞凋亡率;采用NF-κB DNA结合ELISA检测癌细胞核内NF-κB活性.结果:Western blot证实转染IκBαM基因的PC-3M细胞表达高水平IκBαM蛋白.采用12 Gy X射线照射后,pcDNA 3.1/IκBαM转染组PC3M细胞生长活性较未转染组明显减弱;而其细胞凋亡率显著高于未转染组细胞.与未转染组相比,pcDNA 3.1/IκBαM转染组细胞核内NF-κB DNA结合活性降低.结论:IκBαM能阻断放疗引起的激素难治性前列腺癌细胞NF-κB活化,增强放疗对癌细胞的诱导凋亡作用.
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表达IκBα突变体的树突状细胞对大鼠移植肾存活时间的影响
目的 观察IκBα突变体基因修饰的供体树突状细胞(IκBαM-Dc)对大鼠移植肾存活时间的影响.方法 利用重组腺病毒载体将IκBαM基因转染WF大鼠骨髓DC,流式细胞仪检测DC共刺激分子CD80、CD86表达.以wF大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,行同种肾移植.术前7 d,受体输注供体IκBαM-DC作为IκBαM组,未输注IκBαM-DC的受体作为对照组,观察移植肾存活时间和术后肾功能变化.术后第14天检测受体T细胞对供体成熟DC及第三方大鼠成熟DC的反应性.结果 IκBαM明显抑制DC共刺激分子CD80、CD86表达.IκBαM组受体鼠移植肾存活时间为(32.5±7.8)d,较对照组移植肾存活时间(8.5±1.7)d明显延长(P<0.01);而其术后7 d血清肌酐为(57.3±8.2)μmol/L,较对照组血清肌酐(498.0±46.3)μmol/L明显减低.肾移植术后,IκBαM组受体T细胞对供体成熟DC反应明显低于对照组,而对第三方大鼠成熟DC的反应性与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 表达IκBα突变体的供体树突状细胞能诱导受体大鼠T细胞对供体抗原的免疫低反应,显著延长大鼠移植肾存活时间.
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IκBα突变体的真核表达载体构建及表达
目的:构建NF-κB的抑制蛋白IκBα突变体(IκBαM)的真核表达载体,检测其在内皮细胞中的表达.方法:从克隆质粒pSP64TL- IκBαM中用限制性内切酶双酶切IκBαM cDNA片段,克隆到真核表达质粒pcDNA 3.1/myc-His A内构建pcDNA 3.1/myc-His A- IκBαM质粒,并酶切鉴定及测序分析.以脂质体法转染内皮细胞,观察其表达及活性.结果:pcDNA 3.1/myc-His A- IκBαM质粒含有大小正确的IκBαM cDNA碱基片段,其碱基序列为编码目的基因的正确序列.pcDNA 3.1/myc-His A- IκBαM质粒能在内皮细胞中表达,并抑制IL-6分泌.结论:真核表达质粒pcDNA 3.1/myc-His A-IκBαM构建成功, IκBαM蛋白在内皮细胞中表达,并具有良好的生物学活性.
