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氯甲基苯甲酰氨和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷标记示踪大鼠脂肪干细胞的研究
目的 比较研究氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)和5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)的体外标记示踪效果,为ADSCs移植治疗勃起功能障碍体内研究寻找佳的干细胞示踪剂.方法 分离和培养SD大鼠ADSCs,分别采用10μmol/L CM-Dil荧光活性染料和50 μmol/L EdU标记第4代ADSCs,并通过流式细胞术和荧光显微镜检测标记后第7、14、21、28天细胞阳性率.结果 CM-Dil和EdU两者对ADSCs生物学特性均无明显影响.CM-Dil标记ADSCs阳性率达(99.6±0.2)％,第21天后荧光开始衰减,第35天细胞阳性率仍达(64.2±3.3)％；EdU标记ADSCs阳性率为(87.1±1.8)％,7d后细胞阳性率逐渐降低,第14天后急剧降低,第28天细胞阳性率为(14.4±2.7)％.结论 CM-Dil和EdU两者均适用于ADSCs标记示踪,CM-Dil标记具有操作简单、标记阳性率高、荧光持久等优点,适用于长期标记示踪,EdU仅适用于短期标记示踪.
关键词： 氯甲基苯甲酰氨 5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷 示踪 脂肪干细胞 -
基底前脑巢蛋白免疫反应阳性神经元的来源探索
目的 探索基底前脑巢蛋白免疫阳性神经元的来源,为进一步研究巢蛋白免疫阳性神经元的功能及利用巢蛋白表达改善学习记忆能力提供基础.方法 用免疫荧光法研究巢蛋白免疫阳性神经元与5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)阳性细胞的关系、用免疫组化法研究巢蛋白免疫阳性神经元与双皮质素阳性神经元的关系.结果 EdU阳性细胞主要分布于海马齿状回及侧脑室的室管膜及室管膜下区的细胞,在内侧隔核、斜角带核等区域无明显的EdU阳性细胞,巢蛋白免疫反应阳性神经元与EdU阳性细胞无共定位表现.双皮质素阳性细胞主要分布于海马齿状回及侧脑室的室管膜及室管膜下区的细胞,巢蛋白免疫反应阳性神经元与双皮质素阳性神经元之间无双标.结论 基底前脑巢蛋白免疫反应阳性神经元不是一种新生的神经元,可能是成熟胆碱能神经元的一种功能状态.可能是巢蛋白表达赋予了胆碱能神经元特殊的功能.
关键词： 基底前脑 巢蛋白 双皮质素 新生神经元 5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷 -
维拉帕米对肝癌细胞株HepG2细胞增殖及迁移的影响
目的 探讨钙离子通道阻滞剂维拉帕米(VR)对人肝痛细胞株HepG2细胞增殖、DNA合成及细胞迁移的影响.方法 在HepG2细胞培养液中加入不同浓度的VR(0、1、5、10、1 5、20 μg/mL),采用甲基四唑蓝(MTT)法测定VR对HepG2细胞增殖的影响;5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'deoxyuridine,Edu)荧光检测法测定细胞DNA合成期(S期)细胞所占比例;划痕试验测定细胞的迁移距离.结果 MTT结果 显示经VR处理24 h、48 h后除1、5 μg/mLVR在24 h对细胞无抑制作用外(P＞0.05),其余浓度及时间段对HepG2的增殖均有抑制作用(P＜0.05),并且相同浓度VR刺激48 h较24 h对HepG2的抑制率增加(P＜0.05).Edu结果 显示HepG2经VR作用24 h后,0、1、5、10、15、20μg/mL处理组HepG2的S期细胞所占比例分别为51.5%±3.78%、52.4%±3.26%、53.1%±1.94%、39.6%±4.25%、40.2%±2.67%、42.6%±3.13%.10、15、20 μg/m1处理组S期细胞所占比例较1、5μg/mL组及对照组下降(P＜0.05),与MTT结果 一致.划痕试验结果 显示经10、15、20ug/mLVR处理24 h后,与对照组相比,细胞迁移距离缩短(P＜0.05).结论 VR对肝癌细胞株HepG2的增殖及迁移均有抑制作用,VR可能成为肝痛治疗的新靶标.
