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载A3NEP1-40脊髓组织工程支架材料控释规律的研究
目的 探讨A3NEP1-40以RADA-IKVAV/FRM为载体的缓释规律.方法 DMEM/F12溶液能触发RADA-IKVAV/FRM自组装,包裹A3NEP1-40形成均质水凝胶.将包裹125 μg及25 μgA3NEP1-40的水凝胶各自放入2.5ml及0.5ml磷酸盐缓冲液(PBS)中进行释放,并依此分为A、B、C、D4组.应用高效液相色谱仪检测并计算A3NEP1-40每天释放量及累计释放量,统计学分析释放规律.结果 (1)初的24h呈爆发释放,40％的A3NEPl-40自凝胶内释出；平稳释放阶段内样本中可持续检测到A3NEP1-40释放达40d.(2)A组与B组、C组与D组差异无统计学意义,A组与C、D两组、B组与C、D两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 RADA-IKVAV/FRM可以控制A3NEP1-40释放速度,达到缓释效果,是一种较为理想的神经组织工程材料,同时也可以用作载体构建缓释药物.
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新型Nogo受体拮抗剂A3NEP1-40对大鼠坐骨神经损伤的保护作用
目的:研究本课题组自行设计的Nogo受体拮抗剂A3NEP1-40对大鼠坐骨神经损伤后轴突再生的影响及功能恢复的作用.方法:雌性SD大鼠60只随机分为实验组、对照组和空白组.采用直接手术切断大鼠坐骨神经.在术中直视下用微量加液器在受损坐骨神经处直接注射药物,实验组给予A3NEP1--40(5μl,100μmol/L),对照组给予NEP1--40 (5μl,100μmol/L),空白组给予5μl PBS缓冲液.注射完后在神经外膜下植入导管并固定,逐层缝合伤口.术后经导管注射相应的药物进行干预治疗,注射量同前,2天1次,共注射3次,每次注射后再用5μl PBS缓冲液冲管.采用BBB评分法于术后第1、3天和第1、2、3、4、6、8周对大鼠运动功能进行评分.在术后第1、2、4、8周于坐骨神经损伤处取材、石蜡包埋和切片,行HE染色和NF-200免疫组化法观察神经元细胞损伤修复情况.结果:大鼠坐骨经损伤2w后A3NEP1-40组和NEP1-40组的NF200阳性细胞数量明显高于空白组,差异有统计学意义(P＜0.05);3w后A3NEP1-40组和NEP1-40组的BBB评分高于空白组,差异有统计学意义(P＜0.05);而在A3NEP1-40组和NEP1-40组之间NF200阳性细胞数目和BBB评分的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:Nogo受体拮抗剂A3NEP1-40能够促进周围神经损伤处轴突的延伸,促进大鼠急性坐骨神经损伤的后肢运动功能的恢复;为下一步实验(A3NEP1-40结合生物支架材料联合其他坐骨神经修复因子通过缓释技术综合治疗坐骨神经损伤)奠定基础.
